海藻糖是由兩個葡萄糖分子以α,α-1-1 糖苷鍵連接而成的一種非還原雙糖，廣泛存在于細菌、酵母菌、霉菌、食用菌、低等植物、昆蟲、無脊椎動物和高等植物等多種有機體中。海藻糖的非還原性決定了它對酸、堿、高溫等的穩定性。另外，它本身具有很強的吸水性，使它在生物體內具有抗脫水作用，在逆境條件下可保護植物免受不良環境的傷害。植物體內主要以葡萄糖為底物合成海藻糖，該反應首先在海藻糖-6-磷酸合成酶（trehalose-6-phosphate synthase，TPS）的作用下，催化尿苷二磷酸葡萄糖（UDPG）和 6-磷酸葡萄糖反應生成中間產物6-磷酸海藻糖，再在海藻糖-6-磷酸磷酸酶（trehalose 6-phosphate phosphatase，TPP）的作用下去磷酸化，生成海藻糖。因此，測定TPS活性對于研究植物逆境具有重要意義。本試劑盒提供了一種簡單、方便、快速的TPS活性檢測方法，其原理是：TPS催化UDPG與G6P生成海藻糖-6-磷酸，同時產生UDP；UDP在丙酮酸激酶與乳酸脫氫酶作用下，氧化NADH為NAD，NADH在340nm下有特征吸收峰，而NAD沒有。NADH的下降速率與UDP含量成正比，通過測定340nm吸光度下降速率反映TPS活性。
酶標儀或紫外分光光度計（能測340nm處的吸光度）
96孔UV微孔板或微量石英比色皿、可調節式移液槍及槍頭
水浴鍋、制冰機，低溫離心機
去離子水
勻漿器（如果是組織樣本）
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答：可能的原因有：
1、目的蛋白有多個修飾位點，本身可以呈現多條帶，建議查閱文獻或進行生物信息學分析，獲得蛋白序列的修飾位點信息，通過去修飾確定蛋白實際大小；
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時在冰上操作；
3、雜蛋白多，建議處理目的蛋白；
4、抗體特異性不強，建議使用特異性強的抗體；
5、抗體孵育時間過久，建議減少抗體孵育時間；
6、二抗與抗原有交叉反應，建議選擇合適的封閉物；
7、二聚體或多聚體存在，建議增加蛋白質變性過程及強度；
8、底物顯色與曝光時間過長，建議縮短顯色及曝光的時間。
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