GBSS(EC 2.4.1.21)以束縛態存在于淀粉體中,催化淀粉鏈的加長反應,主要負責直鏈淀粉的合成。本試劑盒提供了一種簡便的比色測定法,用于測定樣本中的GBSS活性。其原理是GBSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應,將葡萄糖分子轉移到淀粉引物上,同時生成ADP;進一步通過反應體系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP+還原為NADPH,其中NADPH生成量與前一步反應生成的ADP數量呈正比,通過340nm下測定NADPH的增加量,可以計算GBSS活性。
酶標儀或紫外分光光度計(能測340nm處的吸光度)及恒溫箱
96孔UV微孔板或微量石英比色皿、可調節式移液槍及槍頭
制冰機、低溫離心機
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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