超氧化物歧化酶(SOD,EC1.15.1.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是催化超氧陰離子歧化成 O2和 H2O2的酶。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是 H2O2主要生成酶,它們是抗暴露于O2的所有細(xì)胞中超氧化物自由基毒性的重要抗氧化劑。異常的 SOD 活動(dòng)與肌萎縮側(cè)索硬化,圍產(chǎn)期致死,神經(jīng)紊亂和癌癥等疾病有關(guān)。超氧化物歧化酶有三大類:Cu/Zn,F(xiàn)e/Mn 和 Ni 型。人體中存在三種形式的超氧化物歧化酶。SOD1 位于細(xì)胞質(zhì)中,SOD2 位于線粒體中,SOD3位于細(xì)胞外。本試劑盒提供一種簡(jiǎn)單易用的測(cè)定法,用于定量測(cè)定血清,血漿,組織/細(xì)胞和其它生物體液中的 SOD 酶活性。通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2-),O2-與四唑鹽WST-8反應(yīng)生成水溶性甲瓚,后者在450nm 處有吸收;SOD 可清除O2-,從而抑制了甲臜的形成,因此產(chǎn)生更少的顯色反應(yīng)。用比色法測(cè)定了SOD在450nm處的抑制活性。SOD的活性與甲臜的生成量成負(fù)相關(guān)。
酶標(biāo)儀或可見光分光光度計(jì)(能測(cè)450nm處的吸光度)
恒溫箱、制冰機(jī)、低溫離心機(jī)
96孔板或微量玻璃比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
1. 實(shí)驗(yàn)過程中請(qǐng)穿戴實(shí)驗(yàn)服、口罩和乳膠手套。請(qǐng)按照生物實(shí)驗(yàn)室的國家安全規(guī)定進(jìn)行實(shí)驗(yàn),尤其是在檢測(cè)血樣或其他體液時(shí)。
2. 本試劑盒僅用于實(shí)驗(yàn)室科學(xué)研究,如果本試劑盒用于臨床診斷或任何其他用途,我們將不對(duì)任何后果負(fù)責(zé)。
3. 本試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,并請(qǐng)嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行存儲(chǔ)。
4. 不同批次號(hào)、不同廠家之間的組分不要混用;否則,可能導(dǎo)致結(jié)果異常。
5. 勤換吸頭,避免各組分之間的交叉污染。
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答:可能的原因有:
1、膜沒有完全均勻濕透,建議 使用100% methanol浸透膜;
2、洗膜不充分,可以增加洗液體積和洗滌次數(shù);
3、電極不平衡或者加樣位置偏斜,可以調(diào)整電極和加樣;
4、封閉物用量不足,可以提高封閉物濃度,孵育時(shí)保證封閉液完全浸沒轉(zhuǎn)印膜;
5、封閉物使用不當(dāng),比如檢測(cè)生物素標(biāo)記的蛋白時(shí)不可用脫脂奶粉封閉;
6、封閉時(shí)間不夠,一般情況下室溫37度封閉1小時(shí)以上或者4度封閉過夜;
7、抗體非特異性結(jié)合,可以降低抗體濃度,減少孵育時(shí)間;
8、一抗稀釋度不適宜,可以對(duì)抗體進(jìn)行滴度測(cè)試,選擇適宜的抗體稀釋度;
9、一抗孵育的溫度偏高,建議4℃結(jié)合過夜;
10、抗體濃度過高或洗滌不夠,建議降低抗體濃度,增加洗滌次數(shù)和時(shí)間;
11、化學(xué)顯色底物過多,建議按說明書加入適量的顯色底物。
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