淀粉分支酶(SBE)(EC 2.4.1.18)主要存在于植物中,是參與支鏈淀粉合成的關(guān)鍵酶,催化直鏈淀粉變?yōu)橹ф湹矸邸y定淀粉分支酶(SBE)活性在淀粉生物合成、優(yōu)質(zhì)農(nóng)作物品種選育和品質(zhì)遺傳改良研究中具有重要意義。本試劑盒提供了一種簡單的比色法來檢測植物組織、細(xì)菌等樣本中SBE活性,其原理是:直鏈淀粉和碘結(jié)合后在660nm有特征光吸收,SBE使直鏈淀粉含量減少,從而降低了淀粉-碘復(fù)合物在660nm吸收值,一定時(shí)間內(nèi)吸光度下降的百分率可以反映SBE活性。
酶標(biāo)儀或可見分光光度計(jì)(能測660nm處的吸光度)
恒溫箱、制冰機(jī)、低溫離心機(jī)
96孔板或微量玻璃比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個(gè)修飾位點(diǎn),本身可以呈現(xiàn)多條帶,建議查閱文獻(xiàn)或進(jìn)行生物信息學(xué)分析,獲得蛋白序列的修飾位點(diǎn)信息,通過去修飾確定蛋白實(shí)際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時(shí)在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強(qiáng),建議使用特異性強(qiáng)的抗體;
5、抗體孵育時(shí)間過久,建議減少抗體孵育時(shí)間;
6、二抗與抗原有交叉反應(yīng),建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質(zhì)變性過程及強(qiáng)度;
8、底物顯色與曝光時(shí)間過長,建議縮短顯色及曝光的時(shí)間。
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