淀粉脫分支酶(starch debranching enzyme,DBE)能夠專一、高效的裂解支鏈淀粉的α-1,6-糖苷鍵,產生線性的葡萄糖鏈,對淀粉的結構起“修飾”的作用,淀粉脫分支酶在調整支鏈淀粉側鏈的鏈長方面起著關鍵作用,淀粉分支酶和淀粉脫分支酶的平衡使得支鏈淀粉合成。本試劑盒提供了一種簡單的比色法來檢測生物樣本中DBE酶活性,其原理是DBE催化支鏈淀粉產生還原糖,其與3,5-二硝基水楊酸反應生成棕紅色物質,通過測定其在540nm下吸光值變化可計算得DBE活性。
酶標儀或可見光分光光度計(能測540nm處的吸光度)
水浴鍋、離心機
96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大??;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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