血清總鐵結合能力指血清轉鐵蛋白可結合鐵的能力，其含量高低與缺鐵性貧血、急性肝炎等疾病的發生密切相關。本試劑盒提供了一種簡單、靈敏、快速的TIBC檢測方法，其原理是Fe2+與菲洛嗪反應形成紫紅色化合物，在562nm處有特征吸收峰。堿性條件下，血清轉鐵蛋白可以與Fe3+結合，剩余未結合的Fe3+可以被還原成Fe2+，此時吸光度A1與未結合Fe3+數量正相關，酸化后，轉鐵蛋白結合的Fe3+釋放，并且進一步被還原成Fe2+，此時吸光度A2與總Fe3+數量正相關，A2減A1與TIBC濃度呈正比。
酶標儀或可見分光光度計（能測562nm處的吸光度）及水浴鍋
96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭
去離子水
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答：可能的原因有：
1、目的蛋白有多個修飾位點，本身可以呈現多條帶，建議查閱文獻或進行生物信息學分析，獲得蛋白序列的修飾位點信息，通過去修飾確定蛋白實際大小；
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時在冰上操作；
3、雜蛋白多，建議處理目的蛋白；
4、抗體特異性不強，建議使用特異性強的抗體；
5、抗體孵育時間過久，建議減少抗體孵育時間；
6、二抗與抗原有交叉反應，建議選擇合適的封閉物；
7、二聚體或多聚體存在，建議增加蛋白質變性過程及強度；
8、底物顯色與曝光時間過長，建議縮短顯色及曝光的時間。
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