血清鐵是指血液中轉(zhuǎn)鐵蛋白所結(jié)合的鐵,該指標(biāo)常用于鑒別缺鐵性與非缺鐵性貧血。本試劑盒提供了一種簡單的比色法來檢測血清樣本中轉(zhuǎn)鐵蛋白所結(jié)合的鐵其原理是亞硫酸鈉還原血清Fe3+生成成Fe2+,Fe2+進(jìn)一步與2, 2’- 聯(lián)吡啶顯色,在520nm處有吸收峰,測定該波長光吸收值即可計(jì)算血清鐵含量。
酶標(biāo)儀或可見分光光度計(jì)(能測520nm處的吸光度)及水浴鍋
96孔板或微量玻璃比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
離心機(jī)
去離子水、冰醋酸、氯仿
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個(gè)修飾位點(diǎn),本身可以呈現(xiàn)多條帶,建議查閱文獻(xiàn)或進(jìn)行生物信息學(xué)分析,獲得蛋白序列的修飾位點(diǎn)信息,通過去修飾確定蛋白實(shí)際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時(shí)在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強(qiáng),建議使用特異性強(qiáng)的抗體;
5、抗體孵育時(shí)間過久,建議減少抗體孵育時(shí)間;
6、二抗與抗原有交叉反應(yīng),建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質(zhì)變性過程及強(qiáng)度;
8、底物顯色與曝光時(shí)間過長,建議縮短顯色及曝光的時(shí)間。
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