苯丙氨酸解氨酶(PAL,EC4. 3 1 5)廣泛存在于各種植物和少數微生物中,是植物體內苯丙烷類代謝的關鍵酶和限速酶,在動物體內尚未發現。與一些重要的次生物質如木質素、異黃酮類植保素、黃酮類色素等合成密切相關,在植物正常生長發育、抗病、抗逆反應中起重要作用。 本試劑盒提供了一種簡單易用的比色法,用于分析生物樣品中PAL的活性。其原理是苯丙氨酸解氨酶(PAL)催化L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨,反式肉桂酸在290nm處有大吸收值,通過測定吸光值升高速率計算PAL活性。
酶標儀或紫外分光光度計(能測290nm處的吸光度)及恒溫培養箱
96孔UV板或微量石英比色皿、可調節式移液槍及槍頭
去離子水
勻漿器
1. 實驗過程中請穿戴實驗服、口罩和乳膠手套。請按照生物實驗室的國家安全規定進行實驗,尤其是在檢測血樣或其他體液時。
2. 本試劑盒僅用于實驗室科學研究,如果本試劑盒用于臨床診斷或任何其他用途,我們將不對任何后果負責。
3. 本試劑盒應在有效期內使用,并請嚴格按照說明書進行存儲。
4. 不同批次號、不同廠家之間的組分不要混用;否則,可能導致結果異常。
5. 勤換吸頭,避免各組分之間的交叉污染。
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答:可能的原因有:
1、膜沒有完全均勻濕透,建議 使用100% methanol浸透膜;
2、洗膜不充分,可以增加洗液體積和洗滌次數;
3、電極不平衡或者加樣位置偏斜,可以調整電極和加樣;
4、封閉物用量不足,可以提高封閉物濃度,孵育時保證封閉液完全浸沒轉印膜;
5、封閉物使用不當,比如檢測生物素標記的蛋白時不可用脫脂奶粉封閉;
6、封閉時間不夠,一般情況下室溫37度封閉1小時以上或者4度封閉過夜;
7、抗體非特異性結合,可以降低抗體濃度,減少孵育時間;
8、一抗稀釋度不適宜,可以對抗體進行滴度測試,選擇適宜的抗體稀釋度;
9、一抗孵育的溫度偏高,建議4℃結合過夜;
10、抗體濃度過高或洗滌不夠,建議降低抗體濃度,增加洗滌次數和時間;
11、化學顯色底物過多,建議按說明書加入適量的顯色底物。
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