β-GD廣泛存在于動物組織中,是一種參與腫瘤侵襲和轉移過程的基質降解酶,具有水解固醇葡萄糖醛酸和酸性粘多糖等生理功能。該酶在肝細胞中含量較高。此外在胃癌組織中含量豐富,測定胃液β-GD活性對于研究胃癌具有重要的意義。本試劑盒提供了一種簡單易用的比色法,用于分析各種生物樣品中β-GD的活性。其原理是β-GD催化苯酚β-D-葡萄糖醛酸產生游離的酚酞,通過測定產生酚酞的量來計算β-GD 酶活性。
酶標儀或可見光分光光度計(能測540nm處的吸光度)及水浴鍋
96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭
離心機、制冰機
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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