銅藍蛋白由肝臟合成,是血漿的含銅蛋白,有運輸銅的功能,同時具有氧化酶的活性,是細胞外液重要的抗氧化劑。銅藍蛋白一部分由膽道排泄,尿中含量甚微。銅藍蛋白測定對某些肝、膽、腎等疾病的診斷有一定意義。本試劑盒提供了一種簡單易用的比色法用于檢測血清(漿)、尿液樣本中銅藍蛋白活性,其原理是銅藍蛋白催化 3,3’,5,5’-四甲基聯苯胺生成藍色產物,在 645nm 處有特征吸收峰,依此可得銅藍蛋白活性。
酶標儀或可見分光光度計(能測645nm處的吸光度)及恒溫培養箱
96孔板或微量玻璃比色皿、移液槍及槍頭
去離子水
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答:可能的原因有:
1、膜沒有完全均勻濕透,建議 使用100% methanol浸透膜;
2、洗膜不充分,可以增加洗液體積和洗滌次數;
3、電極不平衡或者加樣位置偏斜,可以調整電極和加樣;
4、封閉物用量不足,可以提高封閉物濃度,孵育時保證封閉液完全浸沒轉印膜;
5、封閉物使用不當,比如檢測生物素標記的蛋白時不可用脫脂奶粉封閉;
6、封閉時間不夠,一般情況下室溫37度封閉1小時以上或者4度封閉過夜;
7、抗體非特異性結合,可以降低抗體濃度,減少孵育時間;
8、一抗稀釋度不適宜,可以對抗體進行滴度測試,選擇適宜的抗體稀釋度;
9、一抗孵育的溫度偏高,建議4℃結合過夜;
10、抗體濃度過高或洗滌不夠,建議降低抗體濃度,增加洗滌次數和時間;
11、化學顯色底物過多,建議按說明書加入適量的顯色底物。
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