羥基自由基?OH是氫氧根離子(OH-)的中性形式,具有高反應(yīng)性(容易變成羥基)。羥自由基作用于體內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸、脂類等生物分子,造成細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能受損,進(jìn)而導(dǎo)致體內(nèi)代謝紊亂引起疾病。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標(biāo)之一,在抗氧化類保健品和藥品研究中得到廣泛應(yīng)用。本試劑盒可檢測各種生物樣本的羥自由基清除能力,其原理是試劑二/Fe2+ 通過Fenton反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基,水楊酸能有效捕捉產(chǎn)生的羥自由基并與其反應(yīng)生成有色物質(zhì)2,3-二羥基苯甲酸,在520nm處有大吸收峰,加入具有清除能力的物質(zhì)后,有色物質(zhì)便會(huì)減少,從而可以根據(jù)吸光值的數(shù)值判斷樣品清除羥自由基的能力。
酶標(biāo)儀或可見分光光度計(jì)(能測520nm處的吸光度)
恒溫箱、制冰機(jī)、低溫離心機(jī)
96孔板或微量玻璃比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、膠濃度不對(duì),不同濃度的膠跑出的蛋白條帶的位置可能有所偏差,可以調(diào)整濃度;
2、抗體孵育不充分,建議增加抗體濃度,延長孵育時(shí)間;
3、酶失活,建議直接將酶和底物進(jìn)行混合,如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內(nèi)、有活性的酶聯(lián)物;
4、目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體,建議查詢相關(guān)文獻(xiàn)確定;
5、標(biāo)本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建議設(shè)置陽性對(duì)照比對(duì)結(jié)果,增加標(biāo)本上樣量。
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