生物體內(nèi)巰基主要包括非蛋白質(zhì)巰基和蛋白質(zhì)巰基。巰基化合物在體內(nèi)具有重要的解毒功能，對生物體的自我調(diào)節(jié)具有非常重要的生理意義。本試劑盒提供了一種簡單的檢測方法，用于檢測各種生物樣本中非蛋白質(zhì)巰基含量，其原理是特制的提取液可以去除樣本中的蛋白質(zhì)，非蛋白質(zhì)巰基基團(tuán)與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應(yīng)，生成黃色化合物，在412nm處有大吸收峰。在一定的濃度范圍內(nèi)，巰基含量與412nm吸光度成線性關(guān)系，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可計(jì)算出樣品中非蛋白質(zhì)巰基含量。
酶標(biāo)儀或可見光分光光度計(jì)（能測412nm處的吸光度）及水浴鍋
96孔板或微量玻璃比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
制冰機(jī)、低溫離心機(jī)
去離子水
勻漿器（如果是組織樣本）
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答：可能的原因有：
1、膜沒有完全均勻濕透,建議 使用100% methanol浸透膜；
2、洗膜不充分，可以增加洗液體積和洗滌次數(shù)；
3、電極不平衡或者加樣位置偏斜，可以調(diào)整電極和加樣；
4、封閉物用量不足，可以提高封閉物濃度，孵育時(shí)保證封閉液完全浸沒轉(zhuǎn)印膜；
5、封閉物使用不當(dāng)，比如檢測生物素標(biāo)記的蛋白時(shí)不可用脫脂奶粉封閉；
6、封閉時(shí)間不夠，一般情況下室溫37度封閉1小時(shí)以上或者4度封閉過夜；
7、抗體非特異性結(jié)合，可以降低抗體濃度，減少孵育時(shí)間；
8、一抗稀釋度不適宜，可以對抗體進(jìn)行滴度測試，選擇適宜的抗體稀釋度；
9、一抗孵育的溫度偏高，建議4℃結(jié)合過夜；
10、抗體濃度過高或洗滌不夠，建議降低抗體濃度，增加洗滌次數(shù)和時(shí)間；
11、化學(xué)顯色底物過多，建議按說明書加入適量的顯色底物。
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