活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產物過氧化物和羥化物等,研究表明,機體95%以上的活性氧(ROS)都來自于線粒體,其失衡所致的氧化應激與細胞生長增殖、發育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關。正常情況下,細胞內抗氧化防御系統與氧自由基處于平衡狀態,細胞內活性氧(ROS)水平維持在較低的生理范圍;在病理情況下,細胞內抗氧化系統與氧自由基的平衡被打破,細胞內活性氧水平過多,就可破壞線粒體酶類、脂類和核酸,使機體出現氧化應激,同時,活性氧還可攻擊線粒體DNA產生氧化損傷,導致線粒體ATP合成減少、線粒體膜電位破壞等結構和功能變化。因此,通過檢測活性氧的變化來判斷線粒體的功能是否正常具有重要意義。本試劑盒提供了一熒光測定法,用于直接定量檢測線粒體 ROS產生速率。其原理是熒光探針-還原型二氯熒光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluores cin diacetate, DCFH-DA)可擴散通過線粒體膜,在線粒體內被酯酶水解,形成無熒光的DCFH,DCFH 迅速與ROS反應生成熒光物—氧化型二氯熒光素(2', 7'-dichlo rofluorescin,DCF)。將熒光強度隨時間變化的數據點擬合,線性回歸直線斜率與ROS產生的速率呈正比。
熒光酶標儀或多功能酶標儀、恒溫培養箱、分析天平
全黑96孔板、可調節式移液槍及槍頭
低溫離心機、制冰機
去離子水
勻漿器或研缽
1. 實驗過程中請穿戴實驗服、口罩和乳膠手套。請按照生物實驗室的國家安全規定進行實驗,尤其是在檢測血樣或其他體液時。
2. 本試劑盒僅用于實驗室科學研究,如果本試劑盒用于臨床診斷或任何其他用途,我們將不對任何后果負責。
3. 本試劑盒應在有效期內使用,并請嚴格按照說明書進行存儲。
4. 不同批次號、不同廠家之間的組分不要混用;否則,可能導致結果異常。
5. 勤換吸頭,避免各組分之間的交叉污染。
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答:可能的原因有:
1、膠濃度不對,不同濃度的膠跑出的蛋白條帶的位置可能有所偏差,可以調整濃度;
2、抗體孵育不充分,建議增加抗體濃度,延長孵育時間;
3、酶失活,建議直接將酶和底物進行混合,如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內、有活性的酶聯物;
4、目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體,建議查詢相關文獻確定;
5、標本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建議設置陽性對照比對結果,增加標本上樣量。
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