活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過(guò)氧化氫、及其下游產(chǎn)物過(guò)氧化物和羥化物等,參與細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過(guò)程。正常情況下,細(xì)胞內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)與氧自由基處于平衡狀態(tài),細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平維持在較低的生理范圍;在病理情況下,細(xì)胞內(nèi)抗氧化系統(tǒng)與氧自由基的平衡被打破,細(xì)胞內(nèi)活性氧水平過(guò)多,就可破壞線粒體酶類、脂類和核酸,使機(jī)體出現(xiàn)氧化應(yīng)激。本試劑盒提供了一熒光測(cè)定法,用于直接定量檢測(cè)組織活性氧。其原理是DCFHDA ROS 探針為還原型二氯熒光素 (2',7'-dichlorodihy drofluores cin diacetate, DCFH-DA)可擴(kuò)散通過(guò)線粒體膜,在線粒體內(nèi)被酯酶水解,形成無(wú)熒光的DCFH,DCFH 迅速與ROS反應(yīng)生成綠色熒光物—氧化型二氯熒光素(2', 7'-dichlo rofluorescin,DCF),具有488/520nm 的大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)。綠色熒光強(qiáng)度與組織內(nèi)活性氧水平成正比,檢測(cè)DCFHDA產(chǎn)物的熒光就可以知道組織內(nèi)活性氧的水平。
熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀或多功能酶標(biāo)儀、恒溫培養(yǎng)箱、分析天平
全黑96孔板、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
低溫離心機(jī)、制冰機(jī)
純水、PBS
勻漿器或研缽
1. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)穿戴實(shí)驗(yàn)服、口罩和乳膠手套。請(qǐng)按照生物實(shí)驗(yàn)室的國(guó)家安全規(guī)定進(jìn)行實(shí)驗(yàn),尤其是在檢測(cè)血樣或其他體液時(shí)。
2. 本試劑盒僅用于實(shí)驗(yàn)室科學(xué)研究,如果本試劑盒用于臨床診斷或任何其他用途,我們將不對(duì)任何后果負(fù)責(zé)。
3. 本試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,并請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行存儲(chǔ)。
4. 不同批次號(hào)、不同廠家之間的組分不要混用;否則,可能導(dǎo)致結(jié)果異常。
5. 勤換吸頭,避免各組分之間的交叉污染。
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答:如果能夠排除下面的幾個(gè)問(wèn)題,那么問(wèn)題多半出現(xiàn)在一抗和抗原制備上。
1、二抗的HRP 活性太強(qiáng),將底物消耗光;
2、ECL底物中H2O2不穩(wěn)定,失活;
3、ECL底物沒(méi)覆蓋到相應(yīng)位置;
4、一抗選擇不當(dāng);
5、二抗失活。
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