白蛋白由肝實質細胞合成,在血漿蛋白中含量多,具有重要的生理功能,包括維持膠體滲透壓,并可與長鏈脂肪酸、膽汁酸、膽紅素、血紅素、鈣和鎂離子等物質結合。它擁有抗氧化性和抗凝血性,能充當營養物質和藥物的運輸載體,同時也是血漿PH值的緩沖劑。血清白蛋白含量直接關系到肝臟疾病、腎臟疾病、營養不良或蛋白流失性腸道病癥的發生發展,是臨床檢測的一個重要指標。本試劑盒提供了一種簡便的比色測定法,用于測定樣本中的白蛋白含量。其原理是白蛋白在pH4.2的緩沖液中帶正電荷,可與帶負電荷的染料溴甲酚綠結合形成藍綠色復合物,在波長630nm處有吸收峰,在一定范圍內其顏色深淺與白蛋白濃度成正比例。
酶標儀或紫外分光光度計(能測630nm處的吸光度)及恒溫箱
96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭
去離子水
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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