線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ又稱琥珀酸-輔酶 Q 還原酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中，催化琥珀酸氧化生成延胡索酸，同時(shí)輔基 FAD 還原為 FADH2，后者進(jìn)一步還原氧化型輔酶Q生成還原型輔酶Q，是呼吸電子傳遞鏈的支路。本試劑盒提供了一種簡單的檢測方法，用于檢測生物體內(nèi)線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ活性，其原理是線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ的催化產(chǎn)物還原型輔酶Q可進(jìn)一步還原2,6-二氯吲哚酚，2,6-二氯吲哚酚在605nm有特征吸收峰，通過檢測2,6-二氯吲哚酚的減少速率來計(jì)算該酶活性。
酶標(biāo)儀或紫外分光光度計(jì)（能測605nm處的吸光度）及恒溫箱
96孔板或微量玻璃比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
制冰機(jī)、低溫離心機(jī)
去離子水
勻漿器（如果是組織樣本）
更新中
答：可能的原因有：
1、目的蛋白有多個修飾位點(diǎn)，本身可以呈現(xiàn)多條帶，建議查閱文獻(xiàn)或進(jìn)行生物信息學(xué)分析，獲得蛋白序列的修飾位點(diǎn)信息，通過去修飾確定蛋白實(shí)際大小；
2、樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解,建議加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時(shí)在冰上操作；
3、雜蛋白多，建議處理目的蛋白；
4、抗體特異性不強(qiáng)，建議使用特異性強(qiáng)的抗體；
5、抗體孵育時(shí)間過久，建議減少抗體孵育時(shí)間；
6、二抗與抗原有交叉反應(yīng)，建議選擇合適的封閉物；
7、二聚體或多聚體存在，建議增加蛋白質(zhì)變性過程及強(qiáng)度；
8、底物顯色與曝光時(shí)間過長，建議縮短顯色及曝光的時(shí)間。
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