異檸檬酸裂解酶（Isocitrate Lyase ,ICL；EC4.1.3.1）主要存在于植物和微生物中，油料作物種子在萌發(fā)過程中，通過乙醛酸循環(huán)及其他過程將脂肪轉(zhuǎn)變成碳水化合物。在乙醛酸循環(huán)這一獨(dú)特的代謝過程中，異檸檬酸裂解酶是關(guān)鍵酶之一。在反應(yīng)系統(tǒng)中，異檸檬酸裂解酶催化異檸檬酸的分解，形成一分子乙醛酸和一分子琥珀酸。本試劑盒提供了一種簡單、方便、快速的ICL活性檢測(cè)方法，其原理是：ICL催化異檸檬酸降解為乙醛酸和琥珀酸，乙醛酸和NADH在LDH的作用下生成乙醇和NAD，NADH在340nm下有特征吸收峰，而NAD沒有，在340nm下測(cè)定NADH的減小速率可間接反應(yīng)ICL活性。
酶標(biāo)儀或紫外分光光度計(jì)（能測(cè)340nm處的吸光度）
96孔UV微孔板或微量石英比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
水浴鍋、制冰機(jī)，低溫離心機(jī)
去離子水
勻漿器（如果是組織樣本）
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答：可能的原因有：
1、目的蛋白有多個(gè)修飾位點(diǎn)，本身可以呈現(xiàn)多條帶，建議查閱文獻(xiàn)或進(jìn)行生物信息學(xué)分析，獲得蛋白序列的修飾位點(diǎn)信息，通過去修飾確定蛋白實(shí)際大小；
2、樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解,建議加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時(shí)在冰上操作；
3、雜蛋白多，建議處理目的蛋白；
4、抗體特異性不強(qiáng)，建議使用特異性強(qiáng)的抗體；
5、抗體孵育時(shí)間過久，建議減少抗體孵育時(shí)間；
6、二抗與抗原有交叉反應(yīng)，建議選擇合適的封閉物；
7、二聚體或多聚體存在，建議增加蛋白質(zhì)變性過程及強(qiáng)度；
8、底物顯色與曝光時(shí)間過長，建議縮短顯色及曝光的時(shí)間。
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