果膠是植物細胞壁主要組成成分之一,分為水溶性果膠和不溶性果膠,不溶性果膠為原果膠。原果膠是不溶 于水的物質,但可在酸、堿、鹽等化學試劑及酶的作用下,加水分解轉變成水溶性果膠,在食品、紡織、印染、 煙草、冶金等領域具有較廣泛的應用。本試劑盒提供了一種簡單的檢測方法,可檢測樣本中原果膠含量,原果膠在稀酸中水解為可溶性果膠,并進一步轉化為半乳糖醛酸,產物在強酸中與咔唑縮合生成紫紅色化合物,在530nm處有特征吸收峰。通過測定530nm吸光度,從而計算出原果膠含量。
酶標儀或可見分光光度計(能測530nm處的吸光度)
96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭
低溫離心機、制冰機
去離子水、濃硫酸
勻漿器
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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