線粒體呼吸鏈復合體Ⅳ又稱細胞色素C氧化酶，也是線粒體電子傳遞呼吸鏈主路和支路的共有成分，負責催化還原型細胞色素C的氧化，并終把電子傳遞給氧，生成水。本試劑盒提供了一種簡單的檢測方法，用于檢測生物體內線粒體呼吸鏈復合體Ⅳ活性，其原理是還原型細胞色素C在550nm有特征光吸收，線粒體呼吸鏈復合體 Ⅳ催化還原型細胞色素C生成氧化型細胞色素C，氧化型細胞色素C在550nm沒有特征光吸收，因此550nm光吸收下降速率能夠反映線粒體呼吸鏈復合體Ⅳ酶活性。
酶標儀或紫外分光光度計（能測550nm處的吸光度）及恒溫箱
96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭
制冰機、低溫離心機
去離子水
勻漿器（如果是組織樣本）
更新中
答：可能的原因有：
1、目的蛋白有多個修飾位點，本身可以呈現多條帶，建議查閱文獻或進行生物信息學分析，獲得蛋白序列的修飾位點信息，通過去修飾確定蛋白實際大小；
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時在冰上操作；
3、雜蛋白多，建議處理目的蛋白；
4、抗體特異性不強，建議使用特異性強的抗體；
5、抗體孵育時間過久，建議減少抗體孵育時間；
6、二抗與抗原有交叉反應，建議選擇合適的封閉物；
7、二聚體或多聚體存在，建議增加蛋白質變性過程及強度；
8、底物顯色與曝光時間過長，建議縮短顯色及曝光的時間。
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