HYP是機體膠原蛋白主要成分之一,膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等,因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項重要指標。本試劑盒提供了一種簡單的檢測方法,可檢測各種生物樣本中HYP含量,其原理是樣品經水解產生游離的HYP,進一步被氯胺T氧化,氧化產物與對二甲氨基苯甲醛反應,產生紅色化合物,在560nm處有特征吸收峰。通過測定樣品水解液560nm吸光值,可計算HYP含量。
酶標儀或可見分光光度計(能測560nm處的吸光度)及水浴鍋
96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭
天平、低溫離心機、烘箱
去離子水、無水乙醇、異丙醇、6mol/L鹽酸、10mol/L NaOH溶液
玻璃管
1. 實驗過程中請穿戴實驗服、口罩和乳膠手套。請按照生物實驗室的國家安全規定進行實驗,尤其是在檢測血樣或其他體液時。
2. 本試劑盒僅用于實驗室科學研究,如果本試劑盒用于臨床診斷或任何其他用途,我們將不對任何后果負責。
3. 本試劑盒應在有效期內使用,并請嚴格按照說明書進行存儲。
4. 不同批次號、不同廠家之間的組分不要混用;否則,可能導致結果異常。
5. 勤換吸頭,避免各組分之間的交叉污染。
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答:可能的原因有:
1、膠濃度不對,不同濃度的膠跑出的蛋白條帶的位置可能有所偏差,可以調整濃度;
2、抗體孵育不充分,建議增加抗體濃度,延長孵育時間;
3、酶失活,建議直接將酶和底物進行混合,如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內、有活性的酶聯物;
4、目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體,建議查詢相關文獻確定;
5、標本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建議設置陽性對照比對結果,增加標本上樣量。
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