ATP 廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是生物能量通貨,能荷是描述細胞能量代謝狀態(tài)的主要參數(shù)。測定 ATP 含量并且計算能荷,能夠反映能量代謝狀態(tài)。本試劑盒提供了一種簡單的檢測方法檢測生物樣本中ATP的含量活性水平。其原理是肌酸激酶催化肌酸和ATP反應生成磷酸肌酸,可在660nm下用磷鉬酸比色法檢測磷酸肌酸含量,以此反應ATP含量。
酶標儀或可見光分光光度計(能測660nm處的吸光度)及水浴鍋
96孔板或微量玻璃比色皿、可調節(jié)式移液槍及槍頭
制冰機、低溫離心機
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現(xiàn)多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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