α-酮戊二酸脫氫酶（α-KGDH；EC 1.2.4.2）廣泛存在于動物、植物、微生物和體外培養細胞的線粒體中，是三羧酸循環調控關鍵酶之一，催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰輔酶A。本試劑盒提供了一種簡單、方便、快速的α-KGDH活性檢測方法，其原理是α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+和輔酶A生成琥珀酰輔酶A、二氧化碳和NADH, NADH在340nm處有特征吸收峰，根據NADH的生成速率可計算獲得α-KGDH的活性。
酶標儀或分光光度計（能測340nm處的吸光度）
96孔UV板或微量石英比色皿、可調節式移液槍及槍頭
水浴鍋、制冰機，低溫離心機
去離子水
勻漿器（如果是組織樣本）
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答：可能的原因有：
1、目的蛋白有多個修飾位點，本身可以呈現多條帶，建議查閱文獻或進行生物信息學分析，獲得蛋白序列的修飾位點信息，通過去修飾確定蛋白實際大??；
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時在冰上操作；
3、雜蛋白多，建議處理目的蛋白；
4、抗體特異性不強，建議使用特異性強的抗體；
5、抗體孵育時間過久，建議減少抗體孵育時間；
6、二抗與抗原有交叉反應，建議選擇合適的封閉物；
7、二聚體或多聚體存在，建議增加蛋白質變性過程及強度；
8、底物顯色與曝光時間過長，建議縮短顯色及曝光的時間。
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