FAS是脂肪酸合成關(guān)鍵酶,催化乙酰輔酶A和丙二酰輔酶A而生成長鏈脂肪酸。FAS普遍表達于各種組織細胞中,在哺乳動物肝、腎、腦、肺和乳腺以及脂肪組織中表達豐富。本試劑盒可檢測生物體內(nèi)FAS活性,其原理是:FAS催化乙酰CoA、丙二酰CoA和NADPH生成長鏈脂肪酸和NADP+;NADPH在340nm有吸收峰,而NADP+沒有;通過測定340nm光吸收下降速率,計算FAS活性。
酶標儀或紫外分光光度計(能測340nm處的吸光度)
恒溫箱、制冰機、低溫離心機
96孔UV微孔板或微量石英比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、膜沒有完全均勻濕透,建議 使用100% methanol浸透膜;
2、洗膜不充分,可以增加洗液體積和洗滌次數(shù);
3、電極不平衡或者加樣位置偏斜,可以調(diào)整電極和加樣;
4、封閉物用量不足,可以提高封閉物濃度,孵育時保證封閉液完全浸沒轉(zhuǎn)印膜;
5、封閉物使用不當,比如檢測生物素標記的蛋白時不可用脫脂奶粉封閉;
6、封閉時間不夠,一般情況下室溫37度封閉1小時以上或者4度封閉過夜;
7、抗體非特異性結(jié)合,可以降低抗體濃度,減少孵育時間;
8、一抗稀釋度不適宜,可以對抗體進行滴度測試,選擇適宜的抗體稀釋度;
9、一抗孵育的溫度偏高,建議4℃結(jié)合過夜;
10、抗體濃度過高或洗滌不夠,建議降低抗體濃度,增加洗滌次數(shù)和時間;
11、化學顯色底物過多,建議按說明書加入適量的顯色底物。
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