肉毒堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶1(CPT1)又稱為肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶,是存在于線粒體內(nèi)膜的一類酰基轉(zhuǎn)移酶。可逆地催化從酰基輔酶A將酰基轉(zhuǎn)移至L-肉毒堿的反應(yīng),在轉(zhuǎn)運脂肪酸通過線粒體內(nèi)膜的過程中起重要作用。 本試劑盒可檢測生物樣本中CPT1活性,其原理是基于肉堿和脂酰輔酶A在丙二酰輔酶A存在與否的條件下,通過肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶(CPT1)的作用,產(chǎn)生脂酰肉堿,并釋放出巰基輔酶A(COA-SH),與Ellman試劑DNTB反應(yīng)后,產(chǎn)生黃色的TNB。通過其吸收峰值得變化(412nm),來定量分析CPT1的活性。
酶標儀或可見光分光光度計(能測412nm處的吸光度)
制冰機、低溫離心機
96孔板或微量玻璃比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
去離子水、無水乙醇
勻漿器或研缽(如果是組織樣本)
1. 實驗過程中請穿戴實驗服、口罩和乳膠手套。請按照生物實驗室的國家安全規(guī)定進行實驗,尤其是在檢測血樣或其他體液時。
2. 本試劑盒僅用于實驗室科學(xué)研究,如果本試劑盒用于臨床診斷或任何其他用途,我們將不對任何后果負責(zé)。
3. 本試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,并請嚴格按照說明書進行存儲。
4. 不同批次號、不同廠家之間的組分不要混用;否則,可能導(dǎo)致結(jié)果異常。
5. 勤換吸頭,避免各組分之間的交叉污染。
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答:可能的原因有:
1、膠濃度不對,不同濃度的膠跑出的蛋白條帶的位置可能有所偏差,可以調(diào)整濃度;
2、抗體孵育不充分,建議增加抗體濃度,延長孵育時間;
3、酶失活,建議直接將酶和底物進行混合,如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內(nèi)、有活性的酶聯(lián)物;
4、目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體,建議查詢相關(guān)文獻確定;
5、標本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建議設(shè)置陽性對照比對結(jié)果,增加標本上樣量。
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