低密度脂蛋白為血清蛋白之一,主要由肝臟合成,是一種運(yùn)載膽固醇進(jìn)入外周組織細(xì)胞的脂蛋白顆粒。低密度脂蛋白能夠進(jìn)入動(dòng)脈壁細(xì)胞并帶入膽固醇,還可被氧化成氧化低密度脂蛋白。當(dāng)?shù)兔芏戎鞍祝绕涫茄趸揎椀牡兔芏戎鞍?/span>(OX-LDL)過(guò)量時(shí),它攜帶的膽固醇便積存在動(dòng)脈壁上,久了容易引起動(dòng)脈硬化。因此低密度脂蛋白被稱為"壞的膽固醇"。低密度脂蛋白與冠心病的發(fā)生和動(dòng)脈粥樣硬化損傷呈正相關(guān),是脂類疾病分類和風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)的一個(gè)重要指標(biāo)。本試劑盒可檢測(cè)生物體內(nèi)LDL-C含量。其原理是:用沉淀劑分離血清中的低密度脂蛋白膽固醇,利用膽固醇酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇(FC)和游離脂肪酸(FFA),從而把膽固醇酯轉(zhuǎn)化為FC;進(jìn)一步利用膽固醇氧化酶催化FC氧化,生成△4-膽甾烯酮和 H2O2;再利用過(guò)氧化物酶催化 H2O2氧化 4-氨基安替比林和酚,生成紅色醌類化合物;在 500nm 有特征吸收峰。
酶標(biāo)儀或可見(jiàn)分光光度計(jì)(能測(cè)500nm處的吸光度)
恒溫箱、制冰機(jī)、低溫離心機(jī)
96孔板或微量玻璃比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
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答:可能的原因有:
1、膠濃度不對(duì),不同濃度的膠跑出的蛋白條帶的位置可能有所偏差,可以調(diào)整濃度;
2、抗體孵育不充分,建議增加抗體濃度,延長(zhǎng)孵育時(shí)間;
3、酶失活,建議直接將酶和底物進(jìn)行混合,如果不顯色則說(shuō)明酶失活了。選擇在有效期內(nèi)、有活性的酶聯(lián)物;
4、目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體,建議查詢相關(guān)文獻(xiàn)確定;
5、標(biāo)本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建議設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照比對(duì)結(jié)果,增加標(biāo)本上樣量。
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