磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)(EC 4.1.1.31)廣泛存在于動物、植物、微生物和細胞中,是催化磷酸烯醇式丙酮酸與二氧化碳反應生成草酰乙酸呈不可逆反應的酶,對三羧酸循環(huán)的運轉起重要調節(jié)作用。本試劑盒提供了一種簡單易用的比色法,用于檢測各種生物樣本PEPC活性。其原理是磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)催化磷酸烯醇式丙酮酸和CO2生成草酰乙酸和HPO42-,蘋果酸脫氫酶進一步催化草酰乙酸和NADH生成蘋果酸和NAD+,NADH在340nm有特征吸收峰,而NAD+沒有,通過測定340nm光吸收下降速率,即可計算PEPC活性。
酶標儀或紫外分光光度計(能測340nm處的吸光度)及恒溫箱
96孔UV板或微量石英比色皿、可調節(jié)式移液槍及槍頭
低溫離心機、制冰機
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、膠凝的不均勻或聚合不好,建議灌膠前將溶液充分混勻;
2、某些樣品鹽濃度較高,建議除鹽或將樣品鹽濃度調成一致;
3、緩沖液陳舊,成分改變,可以重配;
4、凝膠下面有氣泡,電泳前要先將氣泡趕走;
5、電泳時溫度過高,可以降低電流或電壓;
6、樣品中含有不溶性顆粒,建議樣品充分攪拌混勻。
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