肉桂酸-4-羥化酶（C4H）又稱反式肉桂酸-4-單氧化酶，是催化桂皮酸形成咖啡豆、香豆酸的酶。C4H多存在于高等植物、酵母、菌類中，屬于細胞木質(zhì)素合成途徑中間的關(guān)鍵酶。該酶催化肉桂酸羥化作用產(chǎn)生4-香豆酸鹽，是苯丙烷途徑中繼L-苯丙氨酸解氨酶之后的第二個關(guān)鍵酶。本試劑盒提供了一種簡單、方便、快速的C4H活性檢測方法，其原理是C4H催化肉桂酸和NADP生成4-香豆酸鹽和NADPH，NADPH在340nm處有特征吸收峰，在340nm下測定NADPH生成速率，即可反映C4H活性。
酶標(biāo)儀或紫外分光光度計（能測340nm處的吸光度）及恒溫箱
96孔UV微孔板或微量石英比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
制冰機、低溫離心機
去離子水
勻漿器（如果是組織樣本）
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答：可能的原因有：
1、膜沒有完全均勻濕透,建議 使用100% methanol浸透膜；
2、洗膜不充分，可以增加洗液體積和洗滌次數(shù)；
3、電極不平衡或者加樣位置偏斜，可以調(diào)整電極和加樣；
4、封閉物用量不足，可以提高封閉物濃度，孵育時保證封閉液完全浸沒轉(zhuǎn)印膜；
5、封閉物使用不當(dāng)，比如檢測生物素標(biāo)記的蛋白時不可用脫脂奶粉封閉；
6、封閉時間不夠，一般情況下室溫37度封閉1小時以上或者4度封閉過夜；
7、抗體非特異性結(jié)合，可以降低抗體濃度，減少孵育時間；
8、一抗稀釋度不適宜，可以對抗體進行滴度測試，選擇適宜的抗體稀釋度；
9、一抗孵育的溫度偏高，建議4℃結(jié)合過夜；
10、抗體濃度過高或洗滌不夠，建議降低抗體濃度，增加洗滌次數(shù)和時間；
11、化學(xué)顯色底物過多，建議按說明書加入適量的顯色底物。
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