ProDH是存在于線粒體內(nèi)的催化脯氨酸降解的關鍵酶。脯氨酸是分布廣泛的一種滲透物質(zhì),在脅迫條件下很多植物可以通過增加合成、減少降解而在體內(nèi)累積大量脯氨酸,降低ProDH活性對于調(diào)節(jié)滲透平衡、防止?jié)B透脅迫對植物造成傷害、清除自由基、保護細胞結構具有重要意義。本試劑盒提供了一種簡單、方便、快速的ProDH活性檢測方法,其原理是ProDH催化脯氨酸脫氫生成吡咯啉-5-羧酸,脫下的氫通過吩嗪二甲酯硫酸(PMS)傳遞,從而還原 2,6-二氯靛酚(2,6-DCPIP)。2,6-DCPIP在600nm處具有特征吸收峰,通過檢測600nm處吸光值的吸光值的變化反映酶活性的高低。
酶標儀或分光光度計(能測600nm處的吸光度)
96孔板或微量比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
水浴鍋、制冰機,低溫離心機
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因包括培養(yǎng)基質(zhì)量、血清質(zhì)量、溫度、pH值、氣體比例等。
解決方法有:
1. 使用高質(zhì)量的培養(yǎng)基和血清,確保其無菌、無支原體污染,并保證在保質(zhì)期內(nèi)使用;
2. 培養(yǎng)箱溫度和氣體比例要保持穩(wěn)定,定期校準;
3. 每天檢查并記錄細胞培養(yǎng)的環(huán)境參數(shù),如溫度、pH值、氣體比例等,以便及時發(fā)現(xiàn)問題;
4. 定期更換培養(yǎng)基,保持細胞營養(yǎng)充足;
5. 對于生長緩慢的細胞株,可以嘗試進行克隆篩選或更換培養(yǎng)基。
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