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Western Blot(WB)實驗中膠片是一片空白,是怎么回事?
答:如果能夠排除下面的幾個問題,那么問題多半出現在一抗和抗原制備上。
1、二抗的HRP 活性太強,將底物消耗光;
2、ECL底物中H2O2不穩定,失活;
3、ECL底物沒覆蓋到相應位置;
4、一抗選擇不當;
5、二抗失活。
脂多糖Lipopolysaccharides (LPS)是革蘭氏陰性細菌細胞壁中的一種特有成分,位于細胞壁的外層并暴露于非 莢膜細菌的細胞表面,有利于維持細胞外膜的完整性,保護細菌免受膽汁鹽和脂類抗生素的破壞。結構上,脂多糖由類脂 A、核心多糖和 O-多糖側鏈組成。其中類脂質A是構成細菌內毒素的主要成分,決定其毒性強弱;而 O-多糖側鏈在不同細菌間是高度變化的,特異性決定細菌的血清型。
1.LPS 儲存液的配制,細胞培養相關實驗中,將 1mg LPS 重懸于 1 mL 無菌平衡鹽溶液或 細胞培養基,輕輕旋渦振蕩直至粉末完全溶解,即得到 1 mg/mL 的儲存液。此儲存液可進 一步用無菌平衡鹽或細胞培養基稀釋至需要的工作濃度。
2. LPS 儲存液的保存:本儲存液(1 mg/mL)可放在 4 ℃保存,約一個月穩定;也可分裝 成單次用量后放到-20 ℃,2 年穩定。避免反復凍融。
1、LPS 溶液應儲存于硅烷化容器內,因為 LPS 可吸附于塑料或某些玻璃器皿,尤其當其濃 度<0.1 mg/mL 時;但當 LPS 濃度大于 1 mg/mL 時,上述吸附則可忽略不計;
2、如使用玻璃器皿,則需旋渦振蕩 LPS 溶液至少 30 min,以重溶被吸附溶;
3、本產品僅供科研使用,請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途
4、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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答:如果能夠排除下面的幾個問題,那么問題多半出現在一抗和抗原制備上。
1、二抗的HRP 活性太強,將底物消耗光;
2、ECL底物中H2O2不穩定,失活;
3、ECL底物沒覆蓋到相應位置;
4、一抗選擇不當;
5、二抗失活。
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