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Western Blot（WB）實(shí)驗(yàn)中背景高咋回事?
答：可能的原因有：
1、膜沒(méi)有完全均勻濕透,建議 使用100% methanol浸透膜；
2、洗膜不充分，可以增加洗液體積和洗滌次數(shù)；
3、電極不平衡或者加樣位置偏斜，可以調(diào)整電極和加樣；
4、封閉物用量不足，可以提高封閉物濃度，孵育時(shí)保證封閉液完全浸沒(méi)轉(zhuǎn)印膜；
5、封閉物使用不當(dāng)，比如檢測(cè)生物素標(biāo)記的蛋白時(shí)不可用脫脂奶粉封閉；
6、封閉時(shí)間不夠，一般情況下室溫37度封閉1小時(shí)以上或者4度封閉過(guò)夜；
7、抗體非特異性結(jié)合，可以降低抗體濃度，減少孵育時(shí)間；
8、一抗稀釋度不適宜，可以對(duì)抗體進(jìn)行滴度測(cè)試，選擇適宜的抗體稀釋度；
9、一抗孵育的溫度偏高，建議4℃結(jié)合過(guò)夜；
10、抗體濃度過(guò)高或洗滌不夠，建議降低抗體濃度，增加洗滌次數(shù)和時(shí)間；
11、化學(xué)顯色底物過(guò)多，建議按說(shuō)明書加入適量的顯色底物。
