本試劑盒提供了簡單又快速的SDS-PAGE彩色(紅色)凝膠配制試劑,采用上層膠(也稱濃縮膠、積層膠)和下層膠(也稱分離膠)的經典配方,加入改良型促凝劑即可快速制備凝膠,避免的傳統制膠法中TEMED的惡臭味,保護了實驗人員的身體健康。本試劑盒中把凝膠配制所需的緩沖試劑、SDS等預混合成下層膠緩沖液(4X)和上層膠緩沖液(4X),簡化了凝膠配制的步驟。下層膠緩沖液中含Tris-HCl(pH8.8)及適量SDS,上層彩膠緩沖液中含Tris-HCl(pH6.8)及適量SDS和彩色(紅色)染料。本試劑盒配制出的濃縮膠為彩色(紅色),點樣孔清晰易辨,呈現實現了加樣過程的可視化,極大的提高了加樣效率,有利于點樣和控制電泳進程。本產品上層膠中的(紅色)染料可在上層膠中穩定存在,不會隨著電泳而遷移至下層膠,不會影響電泳和蛋白染色效果,電泳完成后也便于識別上層膠并切除,不影響后續Western Blot等實驗。
本產品的改良型促凝劑具有更好的穩定性和催化效能,配制過程中無需額外添加TEMED。為確保實驗效果和方便吸取使用,已開蓋使用過的改良型促凝劑可置于4°C保存至少3個月。
本試劑盒可制備厚度0.75mm常規尺寸凝膠100塊,具體配制的凝膠塊數量與凝膠的厚薄以及大小有關。
1. 請盡量使用新鮮配制的電泳緩沖液。
2. 配制下層膠(分離膠)后注入制膠玻璃板中,可在凝膠液面的上方加入適量醇(如乙醇、異丙醇等)覆蓋于下層膠之上,可加快凝膠凝結速度并使得制出的下層膠液面更加平整。
3. 改良型促凝劑的使用量僅作參考,實際用量可根據個人實驗習慣和經驗調整,加入較多量的促凝劑可加速凝膠,反之亦然。
4. 凝膠速度與溫度有顯著的正相關性。同等條件下,溫度越高,凝膠速度越快,室溫過高時建議適當減小改良型促凝劑的用量,室溫較低時,可適當延長凝膠時間。
5. 本產品已加入適量TEMED的替代品,如需進一步加速凝膠,臨配膠前可按需補充適量TEMED。
6. 在配膠之前,使膠溶液及緩沖液平衡到室溫(如室溫放置幾分鐘),可有效避免凝膠中氣泡的形成。由于染料的特殊理化性質,使用前請輕輕上下顛倒混勻。
7. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
8. 本產品僅限于專業人員的科學研究使用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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