本試劑盒提供了簡單又快速的10% SDS-PAGE彩色(紅色)凝膠配制試劑，采用上層膠(也稱濃縮膠、積層膠)和下層膠(也稱分離膠)的預混配方，只需加入改良型促凝劑即可快速制備凝膠，避免的傳統制膠法中TEMED的惡臭味，保護了實驗人員的身體健康，可在短時間內制備多塊凝膠，無需計算所需溶液量，無需稀釋，操作簡便，無需壓膠操作。且使用本產品所配置的上層膠帶有顏色(紅色)，使得蛋白點樣孔清晰呈現，實現了加樣過程的可視化，極大的提高了加樣效率，有利于點樣和控制電泳進程。本產品上層膠中的(紅色)染料可在上層膠中穩(wěn)定存在，不會隨著電泳而遷移至下層膠，不會影響電泳和蛋白染色效果，電泳完成后也便于識別上層膠并切除，不影響后續(xù)Western Blot等實驗。
本產品的改良型促凝劑具有更好的穩(wěn)定性和催化效能，配制過程中無需額外添加TEMED。為確保實驗效果和方便吸取使用，已開蓋使用過的改良型促凝劑可置于4°C保存至少3個月。
本試劑盒可制備厚度0.75mm常規(guī)尺寸的凝膠50塊，具體配制的凝膠塊數量與凝膠的厚薄以及凝膠大小有關。
(以一塊0.75/1.0/1.5mm的mini膠為例)
1. 取等體積下層膠溶液和下層膠緩沖液沖液，各2.0/2.7/4.0mL,輕輕混勻。
2. 向步驟1的混合溶液中加入40/60/80μl的改良型促凝劑，輕輕混勻。
3. 將步驟2的混合溶液注入制膠玻璃板中，使液面和短玻璃板上沿之間的距離比梳齒長0.5cm即可。
4. 取等體積上層膠溶液和彩色上層膠緩沖液，各0.5/0.75/1.0mL,輕輕混勻。（由于染料的特殊理化性質，使用前請搖勻）
5. 向步驟4的混合溶液中加入10/15/20μl的改良型促凝劑，輕輕混勻。
6. 灌制完下層膠，無需壓膠，無需等待下層膠凝固，立即在下層膠液上面，緩慢將步驟5的混合溶液注入制膠玻璃板中，注意請勿過快，否則會沖散下層膠液面，灌滿后插入梳子待凝固（約20- 30min）。
7. 待凝膠全部凝固后，拔去梳齒即可進行后續(xù)電泳試驗。
1. 請盡量使用新鮮配制的電泳緩沖液。
2. 本產品制備出的上層膠和下層膠與傳統的濃縮膠和分離膠配方一致，針對20-100kDa的蛋白都能有很好的濃縮和分離效果，如果針對更小分子量的蛋白，建議選用普美克的12.5% SDS-PAGE彩色凝膠快速配制試劑盒(PMK1015)效果更好；針對更大分子量的蛋白，建議選用普美克的8% SDS-PAGE彩色凝膠快速配制試劑盒(PMK1016)效果更好。
3. 改良型促凝劑的使用量僅作參考,實際用量可根據個人實驗習慣和經驗調整，加入較多量的促凝劑可加速凝膠，反之亦然。
4. 凝膠速度與溫度有顯著的正相關性。同等條件下，溫度越高，凝膠速度越快，室溫過高時建議適當減小改良型促凝劑的用量，室溫較低時，可適當增加改良型促凝劑的用量或延長凝膠時間。
5. 本產品已加入適量TEMED的替代品，如需進一步加速凝膠，臨配膠前可按需補充適量TEMED。
6. 在配膠之前，使膠溶液及緩沖液平衡到室溫(如室溫放置幾分鐘)，可有效避免凝膠中氣泡的形成。
7. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
8. 本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
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答：可能的原因有：
1、目的蛋白有多個修飾位點，本身可以呈現多條帶，建議查閱文獻或進行生物信息學分析，獲得蛋白序列的修飾位點信息，通過去修飾確定蛋白實際大小；
2、樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解,建議加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時在冰上操作；
3、雜蛋白多，建議處理目的蛋白；
4、抗體特異性不強，建議使用特異性強的抗體；
5、抗體孵育時間過久，建議減少抗體孵育時間；
6、二抗與抗原有交叉反應，建議選擇合適的封閉物；
7、二聚體或多聚體存在，建議增加蛋白質變性過程及強度；
8、底物顯色與曝光時間過長，建議縮短顯色及曝光的時間。
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