AP (Ammonium Persulfate），中文名稱過(guò)硫酸銨，作為催化劑與加速劑TEMED(四甲基乙二胺)一起在配制SDS-PAGE凝膠中起作用。在聚合過(guò)程中，TEMED催化過(guò)硫酸銨產(chǎn)生自由基，后者引發(fā)丙烯酰胺單體聚合，同時(shí)甲叉雙丙烯酰胺與丙烯酰胺鏈間產(chǎn)生甲叉鍵交聯(lián)，從而形成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。
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答：可能的原因有：
1、膠濃度不對(duì)，不同濃度的膠跑出的蛋白條帶的位置可能有所偏差，可以調(diào)整濃度；
2、抗體孵育不充分,建議增加抗體濃度，延長(zhǎng)孵育時(shí)間；
3、酶失活，建議直接將酶和底物進(jìn)行混合，如果不顯色則說(shuō)明酶失活了。選擇在有效期內(nèi)、有活性的酶聯(lián)物；
4、目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體，建議查詢相關(guān)文獻(xiàn)確定；
5、標(biāo)本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低，建議設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照比對(duì)結(jié)果，增加標(biāo)本上樣量。
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