彩色預染蛋白 Marker(2.7-40kDa)包含了從2.7kDa到40kDa共9種高度純化并預染的重組蛋白質(2.7,4.2,6.5,10,15, 20,25,30,40kDa) ,其中40kDa條帶為橙紅色,10kDa為綠色,其余條帶為藍色。本產品預染蛋白表觀分子量經過 thermo26632非預染蛋白質分子量標準標定,適合作為 SDS-PAGE和 Western的蛋白質分子量標準,可用于監測電泳過程中蛋白分離效果,檢驗 Western轉膜(PVDF 、尼龍膜或 NC膜)效果,判斷蛋白的分子量大小。
本彩色預染蛋白Marker已經配制在1x SDS-PAGE上樣緩沖液中,可直接上樣使用,不需要煮沸、稀釋和加入還原劑處理。根據上樣孔大小,本彩色預染蛋白質分子量標準通常每次上樣5-10ul(5×1.5mm膠孔5ul足夠),即可在電泳時、電泳后和轉膜后觀察到非常清楚的蛋白條帶。
62.5mM Tris-H3PO4(pH7.5) ,2mM EDTA ,2% (W/V)SDS ,33% (W/V) Glycerol ,5mM DTT, 0.02% (V/V) proclin300。
(1) 室溫下解凍后完全溶解并輕輕充分混勻后使用,不要煮沸;
(2) 取本產品5ul與實驗樣品同時進行聚丙烯酰胺凝膠電泳;建議有條件的實驗室在初次使用本產品時可以根 據自身的實驗條件和實驗習慣通過預實驗確定合適的上樣量,這樣可以節約成本,同時獲得效果更佳的實驗圖片;
(3) 未使用的彩色預染蛋白Marker保存于儲存條件,在 4℃可放置 2 個月。
(1) 為避免反復凍融及污染,可將本產品分裝后,-20℃保存。
(2) 電泳時間不宜過長,長時間可能導致蛋白條帶出現彌散現象,低分子量蛋白可能會泳動出蛋白膠前沿。
(3) Western blot時需要注意小分子特殊性,特別對于小于3kDa的條帶,容易穿膜而過。另外建議轉膜液不添加SDS,若實驗必須使用,建議SDS濃度不要超過0.02-0.04%。
(4) 預染蛋白質在不同的緩沖體系下有不同的表觀分子量,可在該緩沖體系中事先用非預染蛋白質分子量標準校正,并按校正后的結果正常使用。
(5) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
(6) 本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大??;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
答:可能的原因有:
1、膠凝的不均勻或聚合不好,建議灌膠前將溶液充分混勻;
2、某些樣品鹽濃度較高,建議除鹽或將樣品鹽濃度調成一致;
3、緩沖液陳舊,成分改變,可以重配;
4、凝膠下面有氣泡,電泳前要先將氣泡趕走;
5、電泳時溫度過高,可以降低電流或電壓;
6、樣品中含有不溶性顆粒,建議樣品充分攪拌混勻。
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