本產品轉膜緩沖液可以用于Western濕法電轉膜。本產品主要組分為20mM Tris,192mM甘氨酸,pH 8.2-8.6(25℃),不含SDS和甲醇,便于儲存、操作簡單。使用時將粉末全部溶解于 800 ml 蒸餾水中,補加200ml甲醇,即配成1L 1×轉膜緩沖液。本轉膜緩沖液可以回收,回收后可以再使用 2~3 次。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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