無蛋白快速封閉液是一種即用型，高效快速應用于Western Blot實驗的封閉液。封閉時間僅需15-30分鐘，效果優于脫脂奶粉、BSA、酪蛋白等傳統封閉液，獲得更高的信號，更低的背景值，信噪比高。該試劑不含有哺乳動物來源的蛋白成分，避免與抗體發生交叉反應，適用于辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶(AP)和生物素標記的二抗。本產品中添加了不影響HRP和AP活性的防腐劑，不會干擾HRP或AP標記二抗的檢測。同時本產品不含生物素，不會干擾基于生物素的檢測。
1、通常本產品用于PVDF膜及NC膜的封閉時間為15-30分鐘。對于一些背景非常高的抗體，可以嘗試將封閉時間延長為30-60分鐘。此外，如有特殊需要，也完全可以4℃封閉過夜。
2、由于沒有任何一種封閉液是適用于所有實驗體系的，因此對于一些特殊的實驗，可能需要根據具體情況考慮使用其它更合適的封閉液。
3、取放PVDF膜和NC膜應使用平頭鑷子，并僅輕輕夾取其邊角，操作過程須避免膜表面產生劃痕、折痕或壓痕等痕跡。
4、PVDF膜一經甲醇浸潤和活化，需一直保持濕潤，根據Western進行到的具體步驟可放置于western轉膜液或洗滌液等適當溶液中，否則可能會產生難以封閉的異常背景。
5、本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
6、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
1.Huang D ,Li Y ,Han J , et al.Xbp1 promotes odontoblastic differentiation through modulating mitochondrial homeostasis.[J].FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology,2024,38(7):e23600-e23600. (IF 4.4)
答：可能的原因有：
1、目的蛋白有多個修飾位點，本身可以呈現多條帶，建議查閱文獻或進行生物信息學分析，獲得蛋白序列的修飾位點信息，通過去修飾確定蛋白實際大??；
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時在冰上操作；
3、雜蛋白多，建議處理目的蛋白；
4、抗體特異性不強，建議使用特異性強的抗體；
5、抗體孵育時間過久，建議減少抗體孵育時間；
6、二抗與抗原有交叉反應，建議選擇合適的封閉物；
7、二聚體或多聚體存在，建議增加蛋白質變性過程及強度；
8、底物顯色與曝光時間過長，建議縮短顯色及曝光的時間。
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