DAPI染色液(DAPI Staining Solution)是經過精心優化幾乎適用于所有常見細胞和組織細胞核染色的染色液。DAPI，即2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride，也稱DAPIdihydrochloride，分子式為C16H15N5·2HCl ，分子量為350.25 ，CAS Number 28718-90-3。DAPI是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料。和雙鏈DNA結合后可以產生比DAPI自身強20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比，對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。DAPI染色常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。DAPI也常用于普通的細胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。DAPI的大激發波長340nm，大發射波長為488nm；DAPI和雙鏈DNA結合后，大激發波長為364nm，大發射波長為454nm。
本DAPI染色液可以直接用于固定細胞或組織的細胞核染色。
1.對于細胞或組織樣品，固定后，適當洗滌去除固定劑。隨后如果需要進行免疫熒光染色，則先進行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續步驟進行DAPI染色。如果不需要進行其它染色，則直接進行后續的DAPI染色。
2.對于貼壁細胞或組織切片，加入少量DAPI染色液，覆蓋住樣品即可。對于懸浮細胞，至少加入待染色樣品體積3倍的染色液，混勻。
3. 室溫放置3-5分鐘。
4. 吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。
5.直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。細胞發生凋亡時，會看到凋亡細胞的細胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。
1.DAPI對人體有刺激性，操作時請小心，并注意適當防護以避免直接接觸人體或吸入體內。
2.本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
3.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
1.Yumei L ,Laibing L ,Chaolun X , et al.Outer membrane protein A of Acinetobacter baumannii regulates pulmonary inflammation through the TLR2-NF-κB pathway.[J].Veterinary microbiology,2023,284109812-109812. (IF 3.3)
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答：可能的原因有：
1、目的蛋白有多個修飾位點，本身可以呈現多條帶，建議查閱文獻或進行生物信息學分析，獲得蛋白序列的修飾位點信息，通過去修飾確定蛋白實際大小；
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時在冰上操作；
3、雜蛋白多，建議處理目的蛋白；
4、抗體特異性不強，建議使用特異性強的抗體；
5、抗體孵育時間過久，建議減少抗體孵育時間；
6、二抗與抗原有交叉反應，建議選擇合適的封閉物；
7、二聚體或多聚體存在，建議增加蛋白質變性過程及強度；
8、底物顯色與曝光時間過長，建議縮短顯色及曝光的時間。
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