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蘇木素(Hematoxylin)和伊紅(Eosin)聯(lián)合染色，簡稱HE染色，是病理學常規(guī)制片中基本的染色方法，應(yīng)用極其廣泛。蘇木精是從原產(chǎn)中南美的洋蘇木中提取出來的淺黃褐色的結(jié)晶，是一種堿性染色劑，它在被氧化后生成蘇木素，同媒染劑(常用的是三價的鋁或鹽鐵)一起使用，能夠使細胞核染色。在病理診斷、教學和科研工作中，常用HE染色對正常組織和病變組織進行形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察。對于確定或鑒別病變組織、細胞中出現(xiàn)的某些異常物質(zhì)與特殊成分，而需要采用的特殊染色方法、酶組織化學方法、免疫組織化學方法等也均是在觀察HE染色組織切片的基礎(chǔ)上進行的。在HE染色的組織切片中，細胞核呈藍色，細胞漿呈紅色，二者形成鮮明的對比，易于觀察分析。

蘇木素伊紅染色液中，蘇木素染色液采用自主研發(fā)的配方，由進口的高純度蘇木精、氧化劑等組成，不含氧化汞、甲醇等有害物質(zhì)，對細胞核染色效果好。其特點是不易產(chǎn)生沉淀和金屬; 應(yīng)用范圍廣，可以用于人、動物、畜牧、水產(chǎn)等領(lǐng)域，可以用于組織石蠟切片、冰凍切片和組織細胞的染色等；蘇木素染色液可以重復使用。

1、實驗前準備 自備蘇木素分化液（推薦 PMK0555）、蘇木素返藍液（推薦 PMK0556）、二甲苯、梯度乙醇、中性樹膠等。 

2、樣本前處理 

(1) 對于石蠟切片：切片依次經(jīng)二甲苯脫蠟 10 min，更換新鮮的二甲苯脫蠟 10 min，無水乙醇 5min，新 鮮無水乙醇 5 min，90%乙醇 5 min，75%乙醇 5 min，自來水洗。 

(2) 對于冰凍切片：-20℃保存的冰凍切片需靜置 5-10 min 恢復至室溫。如需固定，則經(jīng)所需固定液室溫 后自來水洗。 

3、HE 染色 

(1) 蘇木素染色：上述處理好的切片，進入蘇木素染液染色 3-5 min，自來水洗； 

(2) 分化：切片經(jīng)蘇木素分化液 2-5 s，自來水流水充分沖洗； 

(3) 返藍：蘇木素返藍液返藍 2-5 s，自來水流水充分沖洗；

(4) 伊紅染色：切片依次經(jīng) 85%、95%梯度乙醇脫水，各 5 min。然后進入伊紅染液(醇溶)中染色 5 min，經(jīng) 兩次無水乙醇脫水各 5 min； 

(5) 透明：切片再經(jīng)新鮮無水乙醇脫水 5 min，二甲苯透明 5 min，更換新鮮的二甲苯再透明 5 min。 

(6) 封片：滴加中性樹膠進行封片。

1.染色后用蘇木素分化液將組織中過多結(jié)合的染液脫去。在 HE 染色種常用低濃度鹽酸作為分化液，因為酸 能破壞蘇木素的醌型結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)，使色素與組織分離而褪色。組織在經(jīng)蘇木素染色后，必須經(jīng)過分化去除組織 中過多結(jié)合及非特異性吸附的染料，才能進行伊紅染色，確保細胞核與胞漿顯色分明?？墒褂?PMK0555 蘇木 素分化液。分化過程中，根據(jù)組織切片厚度、組織類型等結(jié)合鏡下觀察適當調(diào)整分化時間。

2.HE 染色中蘇木素染色后的返藍很重要。蘇木素在酸性條件下為離子狀態(tài)，呈紅色；在堿性條件下呈 藍色。組織切片經(jīng)酸性分化液分化后呈紅色或粉紅色，需立即水洗終止分化，再用弱堿性溶液使蘇木素，這個過程就是返藍作用。如果沒有專用的返藍液，用溫水浸洗也能使細胞核返藍，只是所需時間 略長。推薦 PMK0556 蘇木素返藍液。

3.蘇木素及伊紅染色程度可以根據(jù)染色需要進行調(diào)整染色時間。

4.蘇木素染液可重復使用多次，每次用完后需密封保存，防止有效成分揮發(fā)。當組織或細胞著色明顯偏 淺或顏色異常時請更換新的染液。

5.用于染色后脫水的無水乙醇純度需大于 99.9%。如果乙醇含水，伊紅會褪色導致染色不均勻。

6. 伊紅染液(醇溶)可反復使用數(shù)次，用完后注意密封保存，防止有效成分揮發(fā)。當組織著色明顯偏淺時 建議更換新的染液。 

7.切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。系列乙醇應(yīng)經(jīng)常更換新液。 8.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。