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Propidium Iodide簡稱PI，中文名為碘化丙啶。分子式為C27H34I2N4，分子量為668.40，純度>95%。進口分裝，常用于細胞凋亡(apoptosis)或細胞壞死(necrosis)的檢測，常用于流式細胞儀分析。

1. 貼壁細胞復染步驟（熒光顯微鏡檢測）

1） 樣本準備：根據自身樣本選擇合適步驟固定細胞。PI染色一般在其它染色完成后再進行。PI復染要求細胞經透化處理。

2） RNase酶處理：若樣本使用多聚甲醛，甲醛或者戊二醛固定，則需要進行RNase處理。若樣本用甲醇/醋酸或者丙酮固定，通常不需要此步操作。a，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本；b，將本品置于含有100 μg/mL DNase-free RNase的2×SSC溶液中37°C孵育20 min；c，用2×SSC溶液清洗樣本3次，每次1 min。

3） 復染：a，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本；b，直接用2×SSC稀釋1 mg/mL(1.5 mM)PI儲存液 1:3000，得到500 nM的PI工作液。通常添加300 μL染液足夠用于一個蓋玻片細胞制片。染色1-5 min。c，2×SSC清洗幾次，流盡多余液體，加入抗淬滅劑封片(Yeasen,Cat#36308ES08)。d，選擇熒光顯微鏡的合適濾片進行觀察。

2. 懸浮細胞復染步驟（流式細胞儀檢測）

1）樣本準備：根據自身樣本選擇合適的步驟固定細胞。或者使用如下的步驟：

a. 收集細胞，密度約2×105~1×106。離心后吸除上清，輕彈管壁就剩下的液體重懸細胞。加入1 mL常溫存放的PBS；

b. 將所有的重懸細胞轉移到4 mL于-20oC預冷的無水乙醇，在高速渦旋混勻的同時一邊用槍緩慢的添加細胞懸液到乙醇內。于-20oC乙醇中固定5-15 min。

c. 離心收集細胞，除去乙醇。輕彈管壁以彈松細胞后，加入5ml室溫的PBS。允許細胞水化15 min；

2）復染

a. 用染色液（100 mM Tris, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2 , 0.5 mM MgCl2 , 0.1% Nonidet P-40）稀釋1 mg/mL（1.5 mM）PI儲存液 1:500，得到3 μM的PI工作液。1 mL的PI染色液足夠用于每個細胞樣本的檢測。

b. 樣本制備的后一步后離心收集細胞，去除上清，用手輕彈管壁以彈松細胞后，加入1 mL的PI染色工作液。室溫孵育15 min后，流式細胞儀進行細胞分析。若用顯微鏡觀察，則需要離心樣本，去除上清并重懸細胞在新鮮的緩沖液中。吸取1滴懸液到載玻片上，蓋上蓋玻片后觀察。

3. 染色質FISH復染步驟

1）樣本準備：根據標準步驟制備樣本。復染之前的后一步用去離子水清洗樣本以去除玻片上殘留的緩沖液。室溫晾干。此步驟有助于減少非特異性的背景染色。

2）復染

a. 工作液的配制：用PBS緩沖液直接稀釋1 mg/mL(1.5 mM)的PI儲存液1:1000，得到1.5 μM的PI染色工作液。滴加300 μL的工作液直接到樣本。有必要的話，工作液內加入新鮮制備的RNase A（終濃度：10 μg/mL）。可使用塑料蓋玻片均勻分布染液在載玻片上。室溫避光條件下孵育樣本30 min；如果加入RNase則37oC孵育。

b. 去除蓋玻片，用PBS或去離子水清洗以除去沒有結合的染料；

c. 用吸水紙圍繞樣本周圍吸取殘留液體，蓋上玻璃蓋玻片用石蠟或指甲油封住蓋玻片邊緣。也可用抗熒光淬滅劑進行封片。

d. 選擇熒光顯微鏡的合適濾片進行觀察。

1. 碘化丙啶PI溶液是已知的誘變劑，因此PI溶液在丟棄之前需要先經過活性炭處理。

2. 本產品對人體有刺激性，操作時請小心，并注意適當防護以避免直接接觸人體或吸入體內。

3. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放

于普通住宅內。

4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。