髓鞘(myeLin sheath)是包裹在神經(jīng)軸突外面的管狀鞘結(jié)構(gòu)，呈節(jié)段性，具有絕緣作用并提高神經(jīng)沖動(dòng)的傳導(dǎo)速度，在中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)中起保護(hù)軸突作用。髓鞘由鞘磷脂構(gòu)成，其成分主要是類脂質(zhì)和蛋白質(zhì)。髓鞘染色具有一定的病理診斷意義，如果髓鞘發(fā)生病變，在染色時(shí)髓鞘數(shù)量顯著減少或消失，或髓鞘形態(tài)不規(guī)則。
本產(chǎn)品髓鞘染液主要成分為：髓鞘染液A為0.1%固藍(lán)（(LuxoL fast bLue），染液B為碳酸鋰分化液，染液C是70%乙醇。經(jīng)本產(chǎn)品染色后，神經(jīng)髓鞘呈藍(lán)色，背景淡藍(lán)色或近乎無(wú)色。
1. 石蠟切片脫蠟至水。
2. 將髓鞘染液A在65℃烘箱提前預(yù)熱30min。組織切片進(jìn)入預(yù)熱的髓鞘染液A中65℃染色4h（加蓋防止液體蒸發(fā)）。
3. 室溫自然冷卻后取出切片，自來水洗至玻片流水呈無(wú)色。
4. 切片迅速浸入髓鞘染液B中快速分化5s，然后取出切片立即置于髓鞘染液 C 中快速分化10s，即使切片交替浸入髓鞘染液B和髓鞘染液C中進(jìn)行分化，及時(shí)鏡檢直至髓鞘呈藍(lán)色背景近無(wú)色，然后水洗終止分化。
5. 切片經(jīng)3次無(wú)水乙醇脫水，每次5min，再經(jīng)二甲苯透明5min，然后用中性樹膠封片。
1. 髓鞘染液A預(yù)熱很重要，染液溫度會(huì)對(duì)組織著色的強(qiáng)弱有一定影響。
2. 切片經(jīng)染液A染色水洗后，需要盡快分化，避免組織干片。
3. 操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，并佩戴一次性手套。
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答：可能的原因有：
1、目的蛋白有多個(gè)修飾位點(diǎn)，本身可以呈現(xiàn)多條帶，建議查閱文獻(xiàn)或進(jìn)行生物信息學(xué)分析，獲得蛋白序列的修飾位點(diǎn)信息，通過去修飾確定蛋白實(shí)際大小；
2、樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解,建議加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時(shí)在冰上操作；
3、雜蛋白多，建議處理目的蛋白；
4、抗體特異性不強(qiáng)，建議使用特異性強(qiáng)的抗體；
5、抗體孵育時(shí)間過久，建議減少抗體孵育時(shí)間；
6、二抗與抗原有交叉反應(yīng)，建議選擇合適的封閉物；
7、二聚體或多聚體存在，建議增加蛋白質(zhì)變性過程及強(qiáng)度；
8、底物顯色與曝光時(shí)間過長(zhǎng)，建議縮短顯色及曝光的時(shí)間。
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