結締組織狹義上是指其含有的三種纖維:膠原纖維、網狀纖維、彈力纖維,而膠原纖維(collagen fiber)是分布廣、含量多的一種纖維。Masson 三色染色又稱馬松染色,是結締組織染色中經典的一種方法,是膠原纖維染色權威而經典的技術方法。所謂三色染色通常是指染胞核和能選擇性的顯示膠原纖維和肌纖維。該法染色原理與陰離子染料分子的大小和組織的滲透有關:分子的大小由分子量來體現,小分子量易穿透結構致密、滲透性低的組織;而大分子量則只能進入結構疏松的、滲透性高的組織。然而,淡綠或苯胺藍的分子量都很大,因此 Masso染色后肌纖維呈紅色,膠原纖維呈綠色(淡綠)或藍色(苯胺藍),主要用于區分膠原纖維和肌纖維。
Masson三色染色的特點:①染色穩定;②分化時間短,1~2s;③色彩清晰鮮艷;④適用范圍廣,適宜于組織的石蠟切片、冰凍切片等染色;⑤所染切片保存時間長且不易褪色。
1、 切片脫蠟應盡量干凈。固定起著重要的作用,使用不同的固定液可延或縮短染色時間。
2、 取 A1、A2 等量混合即為 Weigert 鐵蘇木素染液,一般 24h 失去染色力。
3、 酸性乙醇分化時間應根據切片厚薄、組織的類別和新舊而定。
4、 弱酸溶液可使色彩更清晰鮮艷,如使用量大可自行配制 0.1~0.3%乙酸溶液予以替代。
5、 磷鉬酸分化時要在鏡下控制,分化到膠原纖維呈淡紅色、纖維呈紅色即可。分化時間根據染色深淺而 定,一般 1~2min。
6、 Masson 藍化液亦可自行配制 Scott 促藍液或 0.1~1%碳酸鋰水溶液予以替代。
如果每次的使用量很小,可以適當分裝后再使用。
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答:如果能夠排除下面的幾個問題,那么問題多半出現在一抗和抗原制備上。
1、二抗的HRP 活性太強,將底物消耗光;
2、ECL底物中H2O2不穩定,失活;
3、ECL底物沒覆蓋到相應位置;
4、一抗選擇不當;
5、二抗失活。
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