瑞氏色素是酸性染料伊紅(Eosin)和堿性染料亞甲藍(Methylene Blue)組成的復合染料, 對原生質的染色有很好的區別作用。吉姆薩染液由天青Ⅱ與伊紅混合而成,染色原理和結果與瑞氏染色法基本相同,瑞氏吉姆薩染液對胞漿著色力較強,能較好的顯示胞漿的嗜堿性程度,特別對血液和骨髓細胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜堿性顆粒,著色清晰,但是對胞核著色偏深,核結構顯色不佳,常與故吉姆薩染液常與瑞氏染液聯合使用。
本產品以進口瑞氏色素和吉姆薩色素為主要原料,通過研磨配制而成,能呈現出清晰的細胞染色效果。經常用于血液和細胞涂片、骨髓細胞涂片、細菌染色。細胞質呈紅色,細胞核及細菌呈藍色,嗜酸性顆粒呈橘紅色。染液中加中性甘油,防止甲醇揮發或氧化,同時也可使血細胞染色較清晰。該染液的特點: 由瑞氏吉姆薩復合染色液和磷酸鹽緩沖液組成,等量混合使用或分別處理標本使用。
1、 常規方法制備血液涂片或骨髓涂片或細菌涂片,待涂片自然干燥。
2、 將血液涂片或骨髓涂片置于染色架上。
3、 滴加適量Wright-Giemsa Stain覆蓋涂片,室溫染色1~2min。
4、 涂片滴加等量磷酸鹽緩沖液,輕輕晃動玻片或采用其他方式混合,使磷酸鹽緩沖液與Wright-Giemsa Stain混勻,室溫靜置3~10min。
5、 步驟3、4亦可以采用如下方法: 取Wright-Giemsa Stain和磷酸鹽緩沖液等量混合,即為Wright-Giemsa工作液,滴加該工作液于血液涂片或骨髓涂片上,室溫靜置3~10min。
6、 用自來水或蒸餾水從玻片一端輕輕沖洗。(注: 也可用磷酸鹽緩沖液等量稀釋后,沖洗玻片,時間控制在30s左右。)
7、 干燥。鏡檢: 先用低倍鏡觀察血涂片,再用油鏡。
結果:
細菌、細胞核:藍色。
組織細胞的細胞質、血紅蛋白、嗜酸性顆粒:粉紅或橘紅色。
1、血液涂片或骨髓涂片應厚薄均勻,以免影響染色效果。
2、涂片染色中,請勿先去除染液或直接對涂片用力沖洗。不能先倒掉染液,以免染料沉著于涂片上。
3、該染色液可重復使用,但不能多次重復,若有沉淀物應過濾后使用。
4、染色過深可用甲醇或乙醇適當脫色,好不復染。如果染色過深或過淺,應調整染色時間或工作液濃度。
5、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
6、該試劑僅用于科研領域,不適用于臨床診斷或其他用途。
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答:可能的原因有:
1、IHC實驗一抗和二抗不兼容;
2、沒有足夠的一抗與目的蛋白結合;
3、抗體可能不適用于IHC,因為其可能無法識別蛋白的天然(3D)形式;
4、一抗/二抗/信號放大試劑盒可能因儲存不當、稀釋不當或多次反復凍融而失去活性;
5、該蛋白不存在于目標組織中;
6、目的蛋白在組織中含量并不豐富;
7、二抗未避光保存(進行熒光檢測時);
8、脫蠟可能不充分;
9、固定步驟可能會改變抗體識別的抗原表位;
10、抗體不能穿透蛋白所定位的細胞核(核蛋白);
11、PBS緩沖液被細菌污染,細菌會破壞目的蛋白上的磷酸基團(磷酸化蛋白);
12、抗原修復不全,對于甲醛固定的組織必須用充分抗原修復來打開抗原表位,以利于與抗體結合。
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