細胞或組織用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后,會導致蛋白之間的交聯(cross-link),從而遮蔽樣品的抗原位點,導致免疫染色時染色信號減弱,甚至出現一些假陽性染色結果。
本抗原修復液采用了常用的檸檬酸鈉緩沖液和EDTA,結合了兩者修復抗原的優點,并經過適當優化,可以更加有效地去除醛類固定試劑導致的蛋白之間的交聯,充分暴露石蠟切片等樣品中的抗原表位,從而大大改善免疫染色效果。
通常石蠟切片都需進行抗原修復處理,而冰凍切片可以不進行抗原修復處理。抗原修復會大大改善石蠟切片的免疫染色效果,但對于冰凍切片的染色效果很多文獻資料表明也有顯著改善。特別是當冰凍切片免疫染色效果欠佳時,可以考慮嘗試進行抗原修復。從原理上來看,無論冰凍切片還是細胞爬片等,只要是用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定的樣品,進行抗原修復都會有效去除蛋白之間的交聯,充分暴露抗原表位,從而大大改善免疫染色效果。
本產品適用于石蠟切片,也可以用于冰凍切片等其它樣品
塑料染色缸、染色架和郵寄夾可以很好地耐受沸水浴,而玻璃染色缸需避免驟冷驟熱導致的玻璃破碎。
本抗原修復液使用前必須用重蒸水或Milli-Q水稀釋40倍,配制成抗原修復液(1X)。
凍存的本產品需適當加熱后才能完全溶解。同時由于本產品含有少量的特殊去垢劑,加熱后會產生非常細密的氣泡而呈現非常均勻的類似渾濁狀,屬于正常現象,并非不溶解或產生了沉淀。室溫放置較長時間后,例如1-2天,溶液會完全澄清。對于溶解后呈現非常均勻的類似渾濁狀的本產品,此時即可取適量稀釋后使用。抗原修復過程中加熱時也會產生非常細密的氣泡而呈現均勻的渾濁狀,也屬于正常現象,請放心使用。
本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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