在組織切片過程中,一些組織內含有骨質或鈣化灶時,含鈣的組織不宜直接用石蠟包埋切片。這是因為鈣和石蠟之間的密度不同,較難切出完整的切片。對含鈣組織好固定之后,再進行脫鈣或二者同時進行。然后進行下游操作如脫水、透明、浸蠟、包埋、切片。用于脫鈣的試劑很多,脫鈣劑包括有機酸、無機酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及電解法脫鈣。EDTA是一種相對較好的螯合脫鈣劑,對組織結構影響小,可以較好的保存組織的某些酶類,經EDTA脫鈣后的組織可以進行免疫組化和原位雜交染色。但是該法脫鈣速度太慢,一般脫需要數周至數月。
EDTA脫鈣液主要由EDTA、磷酸鹽等組成, pH值為7.2。其優點是:①經EDTA脫鈣的組織染色結果好;②對組織的結構損害小。其缺點是:①脫鈣速度很慢,不適合常規標本脫鈣使用;②脫鈣后組織會稍微變硬;③不宜用化學方法確定脫鈣終點。
1、 厚度5mm的骨組織塊脫鈣時間一般脫鈣10~30天即可,大多數在14~60天即可。
2、 適當加溫能加快脫鈣的速度,一般不應超過37~40℃,溫度過高容易使骨組織造成松散解體,尤其不可大于60℃。
3、 脫鈣應徹底,防止脫鈣不足或過度。脫鈣程度應控制在不影響組織切片的同時盡量縮短脫鈣時間,以免脫鈣過長引起組織損害。
4、 脫鈣用具避免使用金屬容器,盡量使用玻璃容器。
5、 骨組織脫鈣應先固定后脫鈣或脫鈣固定同時進行,不應先脫鈣后固定,以便減少組織的損傷程度。
6、 每隔一段時間檢測一次脫鈣程度,脫鈣過度會增加組織的損傷程度,影響染色結果。
7、 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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1、抗原修復方法可能過于苛刻;
2、組織可能未充分固定;
3、組織切片從載玻片上脫落(冰凍切片);
4、組織切片撕裂或折疊,或切片下方可見氣泡;
5、組織形態難以分辨;
6、組織自溶。
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