固定的目的在于保存細胞和組織的原有形態(tài)結(jié)構(gòu),固定劑能阻止內(nèi)源性溶酶體酶對自身組織和細胞的自溶、抑制細菌和霉菌的生長。固定劑通過凝固、生成添加化合物等使蛋白質(zhì)內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,從而使酶失活。固定劑對細胞核細胞外成分發(fā)生物理改變。固定液主要分為醛類固定液、汞類固定液、醇類固定液、氧化劑類固定液、苦味酸鹽類固定液等,較為常用的是醛類中的福爾馬林、醇類中的乙醇。戊二醛固定液會引起蛋白質(zhì)α-螺旋結(jié)構(gòu)變形,不利于過氧化物酶染色。戊二醛固定液固定速度快,滲透力差。
戊二醛固定液(2.5%,電鏡專用)由戊二醛、磷酸鹽、去離子水等組成,pH7.2~7.4,該固定液對細胞核、細胞漿的細微結(jié)構(gòu)固定效果好,經(jīng)常用于電鏡標本的固定。
戊二醛固定液有一定腐蝕性,請在通風較好的環(huán)境下小心操作, 避免吸入。
組織取材的厚度不同,固定時間也不同。常規(guī)活檢組織比較適合的厚度為2~4mm,一般不超過6mm。對組織恰當?shù)倪x材有利于固定液的滲透。
溫度對固定的影響很明顯,提高溫度可以加速固定作用,但本固定液好不要提高溫度。
取出新鮮組織后,應及時固定。無法及時固定時,應保存于生理鹽水中及時送檢。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
1.Tan X ,He Y ,Yu P , et al.The dual role of FSP1 in programmed cell death: resisting ferroptosis in the cell membrane and promoting necroptosis in the nucleus of THP-1 cells.[J].Molecular medicine (Cambridge, Mass.),2024,30(1):102.(IF 6)
1、抗原修復方法可能過于苛刻;
2、組織可能未充分固定;
3、組織切片從載玻片上脫落(冰凍切片);
4、組織切片撕裂或折疊,或切片下方可見氣泡;
5、組織形態(tài)難以分辨;
6、組織自溶。
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