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細胞培養中細胞生長緩慢或不生長的可能原因及解決方法
答:可能的原因包括培養基質量、血清質量、溫度、pH值、氣體比例等。
解決方法有:
1. 使用高質量的培養基和血清,確保其無菌、無支原體污染,并保證在保質期內使用;
2. 培養箱溫度和氣體比例要保持穩定,定期校準;
3. 每天檢查并記錄細胞培養的環境參數,如溫度、pH值、氣體比例等,以便及時發現問題;
4. 定期更換培養基,保持細胞營養充足;
5. 對于生長緩慢的細胞株,可以嘗試進行克隆篩選或更換培養基。
超氧化物陰離子熒光探針即二氫乙錠(Hydroethidine,Dihydroethidium, DHE)是一種常用的熒光檢測探針,可以直接用于活細胞的標記。DHE 被活細胞攝入后,可以在細胞內的超氧化物陰離子作用下脫氫,產生 ethidium。Ethidium (例如溴化乙錠)可以和 RNA 或 DNA 結合產生紅色熒光。當細胞內的超氧化物陰離子水平較高時,產生的 ethidium 較多,紅色熒光就較強,反之則較弱。這樣就可以用 DHE 進行超氧化物陰離子水平的檢測。 DHE本身為藍色熒光,大激發波長為 370nm,大發射波長為 420nm,脫氫后和RNA 或DNA 結合產生紅色熒光,大激發波長為 300nm,大發射波長為 610nm,實際觀察時也可以使用 535nm 作為激發波長。
DHE可以溶解于DMSO,配制成適當的母液。用于細胞內超氧化物陰離子檢測時,DHE的常用濃度為 1-10μM。通常用含有 0.5-5μM的DHE溶液和細胞一起在 37℃孵育 30 分鐘左右進行熒光探針裝載,隨后可以適當洗滌,接著可以直接用流式細胞儀或其它適當熒光檢測儀器進行檢測。
1、 DHE 易在空氣中氧化,請盡量避免暴露于空氣中。
2、 DHE 脫氫后產生毒性較高的 ethidium,請注意防護。
3、 熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
4、 本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品。
5、 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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答:可能的原因包括培養基質量、血清質量、溫度、pH值、氣體比例等。
解決方法有:
1. 使用高質量的培養基和血清,確保其無菌、無支原體污染,并保證在保質期內使用;
2. 培養箱溫度和氣體比例要保持穩定,定期校準;
3. 每天檢查并記錄細胞培養的環境參數,如溫度、pH值、氣體比例等,以便及時發現問題;
4. 定期更換培養基,保持細胞營養充足;
5. 對于生長緩慢的細胞株,可以嘗試進行克隆篩選或更換培養基。
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