本產品適用于從細菌(包括革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌)中提取基因組DNA,采用了高效的細胞裂解緩沖液,利用高載量的硅基提取柱,可快速實現基因組DNA的提取,具有簡單易操作、耗時短以及純度和得率高等優點。
本試劑盒可在60min內完成提取,提取的基因組DNA可用于下游的酶切、PCR擴增等。
準備工作:將溶菌酶(Lysozyme)粉末(自備)溶解于Tris-HCl緩沖液(10mM,pH8.0),配制成10mg/ml的溶解酶溶液。首次使用時,在Wash Buffer中加入相應體積的乙醇,將Proteinase K溶液解凍后分裝保存,以避免反復凍融。
1. 取1-5ml過夜培養菌液樣品(約 10^9個細菌)于1.5ml離心管中,8000rpm離心5min,完全吸棄上清液。
2. 加入200μl Tris-HCl(10 mM, pH 8.0)(自備),渦旋充分重懸菌體。
3. 加入5μl配制好的溶菌酶溶液(10 mg/ml),37℃孵育15min。
可選步驟:如需去除RNA,可加入4μl RNase A溶液(100mg/ml)(自備),移液器吹打混勻后室溫靜置5min。
4. 加入200μl Lysis-Binding Buffer和40μl Proteinase K,用移液器吹打混勻后在70℃水浴中孵育10min。
5. 加入100μl異丙醇,渦旋混勻。
6. 將提取柱置于收集管上,將樣品加入到提取柱中,12000rpm離心1min,棄去流出液。
7. 將提取柱重新置于收集管上,加入500μl Buffer IR,12000rpm離心1min,棄去流出液。
8. 將提取柱重新置于收集管上,加入500μl Wash Buffer,12000rpm離心1min,棄去流出液。
9. 重復步驟 8。
10. 將提取柱再次置于收集管上,12000rpm再次離心1min。
11. 將提取柱置于一個新的1.5ml離心管,加入60-100μl Buffer EB或純水,12000rpm離心1min。(使用55℃預熱的Buffer EB或純水可提高洗脫效率)
1、對于大腸桿菌,OD600為1時,相當于3~4x10^8cells/ml。不同細菌特定OD值對應的細胞數量有所不同。
2、產品(除Proteinase K溶液外)可在15-25℃條件下保存12個月以上。Proteinase K溶液在-20℃條件下可穩定保存12月以上,但是反復凍融可能會影響活性,建議次解凍后分裝保存。
3、次使用時請根據試劑瓶上說明在Wash Buffer中加入乙醇。
4、Lysis-Binding Buffer、Buffer IR含有高濃度鹽分,在低溫下或長期保存會出現結晶,屬正常現象。如出現混濁或結晶,可在37℃孵育5-10 min,即可恢復澄清,不影響使用。
5、Lysis-Binding Buffer、Buffer IR、Wash Buffer含有去垢劑以及乙醇等成分,請避免與皮膚直接接觸。
6、洗脫時,將Buffer EB或水預熱至 55℃可提高洗脫效率。
7、請自備溶菌酶Lysozyme。
8、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
9、本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
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答:可能的原因有:
1、膠凝的不均勻或聚合不好,建議灌膠前將溶液充分混勻;
2、某些樣品鹽濃度較高,建議除鹽或將樣品鹽濃度調成一致;
3、緩沖液陳舊,成分改變,可以重配;
4、凝膠下面有氣泡,電泳前要先將氣泡趕走;
5、電泳時溫度過高,可以降低電流或電壓;
6、樣品中含有不溶性顆粒,建議樣品充分攪拌混勻。
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