本產品適用于從動物組織(如臟器、鼠尾等)中提取基因組DNA,采用了高效的組織裂解緩沖液,利用高載量的硅基提取柱,可實現基因組DNA的快速提取,具有簡單易操作、耗時短以及純度和得率高等優點。
本試劑盒提取的基因組 DNA 可用于下游的酶切、PCR 擴增等。
準備工作:首次使用時,在Wash Buffer中加入相應體積的乙醇。將ProteinaseK溶液解凍后分裝保存,以避免反復凍融。
1. 樣品采集:因不同組織中核酸含量有差異,建議按照下表采集組織樣品。
2. 將上述樣品加入到干凈的1.5ml 離心管中,用干凈的剪刀將組織剪碎(如需提高提取產量,可將組織置于研缽中加入液氮充分研磨,或使用勻漿機充分研磨),加入200μl Tissue Lysis Buffer和40μl Proteinase K,混勻后在55℃水浴中孵育或直至組織被完全裂解(裂解時間取決于樣品類型,一般鼠尾樣品需要3-5小時,甚至消化過夜。臟器裂解時間在1-3小時左右)。
3. 用移液槍頭或1ml注射器(不帶針頭)反復吸吹樣品3-5次,使組織充分裂解。
4. 加入200μl Lysis-Binding Buffer,充分混勻后在70℃孵育10min。
5. 加入100μl異丙醇,充分渦旋混勻。
6. 12000rpm離心5min。
7. 將提取柱置于收集管上,吸取上清液加入到提取柱中,12000rpm離心1min,棄去流出液。
8. 將提取柱重新置于收集管上,加入500μl Buffer IR,12000rpm離心1min,棄去流出液。
9. 將提取柱重新置于收集管上,加入500μl Wash Buffer,12000rpm離心1min,棄去流出液。
10. 重復步驟9。
11. 將提取柱再次置于收集管上,12000rpm離心1min。
12. 將提取柱置于一個新的1.5ml離心管,加入60-100μl Buffer EB或純水,12000rpm離心1min。(使用55℃預熱的Buffer EB或純水可提高洗脫效率)
1、產品(除Proteinase K溶液外)可在15-25℃條件下保存12個月以上。Proteinase K溶液在-20℃條件下可穩定保存12月以上,但是反復凍融可能會影響活性,建議次解凍后分裝保存。
2、次使用時請根據試劑瓶上說明在Wash Buffer中加入乙醇。
3、Lysis-Binding Buffer、Buffer IR含有高濃度鹽分,在低溫下或長期保存會出現結晶,屬正常現象。如出現混濁或結晶,可在37℃孵育5-10min,即可恢復澄清,不影響使用。
4、Lysis-Binding Buffer、Buffer IR、Wash Buffer含有去垢劑以及乙醇等成分,請避免與皮膚直接接觸。
5、洗脫時,將Buffer EB或水預熱至55℃可提高洗脫效率。
6、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
7、本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
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答:如果能夠排除下面的幾個問題,那么問題多半出現在一抗和抗原制備上。
1、二抗的HRP 活性太強,將底物消耗光;
2、ECL底物中H2O2不穩定,失活;
3、ECL底物沒覆蓋到相應位置;
4、一抗選擇不當;
5、二抗失活。
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