鈣熒光探針Fluo-4, AM，橙紅色粉末； 純度：≥90%（HPLC）
鈣指示劑是結(jié)合 Ca2+?后顯示熒光增強(qiáng)的分子。Fluo-3 應(yīng)用在流式細(xì)胞分析上，如涉及籠狀螯合劑光活化、第二信使和神經(jīng)遞質(zhì)的實(shí)驗(yàn)以及基于細(xì)胞的藥理學(xué)篩選，用于 Ca2+?信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的空間動(dòng)力學(xué)成像。Fluo-4 是 fluo-3 的類(lèi)似物，其中兩個(gè)氯取代基被氟取代，導(dǎo)致在 488 nm 波長(zhǎng)處的熒光激發(fā)增強(qiáng)，因此熒光信號(hào)水平更高。將溶解后的指示劑直接加入含有培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)皿中，即可向細(xì)胞加載 AM 酯形式的這類(lèi)鈣離子指示劑。這些指示劑可用于熒光和共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞分析以及微孔板篩選應(yīng)用。?
Fluo-4是一種將Fluo-3結(jié)構(gòu)中的Cl替換成F的鈣熒光探針。由于將Cl替換成了電子吸引力更強(qiáng)的F，它的大激發(fā)波長(zhǎng)會(huì)向短波長(zhǎng)處偏離10 nm左右。這個(gè)波長(zhǎng)更接近于氬激光器的波長(zhǎng)，所以用氬激光器激發(fā)時(shí)，F(xiàn)luo-4的熒光強(qiáng)度比Fluo-3強(qiáng)一倍。Fluo-4, AM穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-4，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)，F(xiàn)luo-4若以游離配體形式存在時(shí)幾乎是非熒光性的，但是當(dāng)它與細(xì)胞內(nèi)鈣離子結(jié)合后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光，大激發(fā)波長(zhǎng)為494nm，大發(fā)射波長(zhǎng)為516nm?？梢允褂眉す夤簿劢癸@微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。
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答：可能的原因包括培養(yǎng)基質(zhì)量、血清質(zhì)量、溫度、pH值、氣體比例等。
解決方法有：
1. 使用高質(zhì)量的培養(yǎng)基和血清，確保其無(wú)菌、無(wú)支原體污染，并保證在保質(zhì)期內(nèi)使用；
2. 培養(yǎng)箱溫度和氣體比例要保持穩(wěn)定，定期校準(zhǔn)；
3. 每天檢查并記錄細(xì)胞培養(yǎng)的環(huán)境參數(shù)，如溫度、pH值、氣體比例等，以便及時(shí)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題；
4. 定期更換培養(yǎng)基，保持細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)充足；
5. 對(duì)于生長(zhǎng)緩慢的細(xì)胞株，可以嘗試進(jìn)行克隆篩選或更換培養(yǎng)基。
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