SNU-398 于 1990 年由 J.-G. Park 及其同事取自一名韓國患者的間變性肝細胞癌,該患者已通過脂質體加多柔比星和絲裂霉素-C 的組合進行了經導管動脈栓塞治療。既可以附著細胞也可以懸浮細胞。懸浮的細胞是可行的,不應丟棄。通過溫和離心 (125 xg) 回收懸浮細胞,以與貼壁細胞群一起進行繼代培養。
1)來源: 人,肝組織
2)形態: 上皮樣,多數貼壁少量懸浮
3)含量: >1x106 細胞數
4)規格: T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝
5)用途: 僅供科研使用
干冰運輸及復蘇好存活細胞:(1)1mL 凍存管包裝干冰運輸,收 到后-80 度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發現干冰已揮發干凈、凍存 管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。(2)T25 瓶復蘇的存活 細胞常溫發貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作
1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態的依據。
3)貼壁細胞:T25瓶置于37℃培養箱中約2-3h,顯微鏡下觀察細胞的情況,若細胞密度在70%-80%左右,可進行傳代,首次傳代建議1:2(也可根據情況調整),若細胞生長不足70%,建議消化處理后,轉移到新的T25培養瓶(1:1)繼續培養。
4)半貼細胞或貼壁不牢(懸浮)細胞:T25瓶置于37℃培養箱中約2-3h,顯微鏡下觀察細胞的情況,若細胞密度在60%以下,客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用完全培養基重懸后打回到原培養瓶中繼續培養,若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代,傳代時需要收集培養基中懸浮的細胞離心后回收。
5)備注:運輸用的培養基(灌注培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1:2傳代
1)準備培養基:1640培養基;優質胎牛血清,10%;p/s雙抗,1%
注:上皮樣細胞,多數貼壁,懸浮細胞和貼壁細胞同時存在。傳代凍存時請收集懸浮細胞
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5% 。 溫度:37 攝氏度,培養箱 濕度為 70%-80%。
3)凍存液:90%FBS,10%DMSO,現用現配
1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作, 并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意: 凍存管浸沒在液氮中會泄漏,并會慢慢充滿液氮。解凍時,液氮轉化成氣相可能 導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害
更新中
答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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